Search Thermo Fisher Scientific
Search Thermo Fisher Scientific
形質転換とは、細胞外の遺伝物質を細胞に導入し、それを発現するよう細胞を改変することを言います。 形質転換は、菌株に組換えプラスミドDNAを導入するのによく使われる手法です。自然形質転換を起こす菌株、または人為操作で形質転換を起こすことが可能な菌株が用いられます。 後者は、コンピテント・バクテリアまたは単にコンピテントセルと呼ばれています。
形質転換に用いられるコンピテントセルには大きく分けて2つのタイプがあります。ケミカルコンピテントセルと
エレクトロコンピテントセルです。
ケミカルコンピテントセルは、塩化カルシウムによる処理を施され、プラスミドDNAが細胞膜へ接着しやすくなっています。 During chemical transformation, the cells are heat-shocked cells are heat-shocked at a precise temperature and length of time (usually 42°C for 30 seconds). This helps to open the pores in the cell membrane so plasmid DNA from the surrounding environment can enter the cell.
Electrocompetent cells are prepared for transformation using Electroporation for a few milliseconds. This method uses an electrical pulse to creates pores so that the material can enter the cell from the surrounding environment.
Transformation is the process by which bacterial cells take up foreign DNA from their environment. Typically, this is done in the lab for two main reasons: to propagate a recombinant plasmid or to obtain the results of a sub-cloning reaction. The procedure shown in this video can be used with most chemically competent cells. We are focusing on the protocol provided with Invitrogen's Top10 strain of competent cell.
ケミカルコンピテントセル、エレクトロコンピテントセルのどちらを選択するか考慮する際に重要となるのは、形質転換効率です。 形質転換効率(cfu/μg)は、プラスミドDNA 1 μg当たりの形質転換体数(またはcolony forming unit)で表されます。
お客様が必要な形質転換効率は、主にそのアプリケーションによって決まります。 To meet different cloning requirements, competent cells are available in a wide range of transformation efficiencies - from >1 × 106 for routine cloning to >3 × 1010 cfu/μg pUC DNA for library construction or working with limited amounts of DNA.
図1。 ご使用になるアプリケーションのニーズに対応できるよう、さまざまな形質転換効率を持つ製品を取りそろえております。 One Shot® cells are provided at >5 x 109, 1 x 109, or >1 x 108 cfu/µg.
通常、コンピテントセルの形質転換効率は、飽和量以下のスーパーコイルpUC DNA(およそ10–500 pg)を形質転換して計測します。 計測結果は、プラスミドDNA 1マイクログラム当たりの形質転換体数(あるいはコロニー形成ユニット数)(cfu/μg)で表されます。
通常、コンピテントセルの形質転換効率は、飽和量以下のスーパーコイルpUC DNA(およそ10–500 pg)を形質転換して計測します。 計測結果は、プラスミドDNA 1マイクログラム当たりの形質転換体数(あるいはコロニー形成ユニット数)(cfu/μg)で表されます。
形質転換効率の算出
コロニー数 | x | 106 pg | x | 300 µL 形質転換溶液全体のボリューム | = | 形質転換体数 |
100 pgの形質転換DNA | µg | ? µl プレート | µgのプラスミドDNA |
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.