液体ではなくビーズを移動して、純度とサンプルの完全性を確保

多くの自動液体分注システムや精製機器は、試薬をウェルに入れたり、そこから出して、核酸分離のさまざまなステップを実行します。一方、Thermo Scientific KingFisherサンプル精製システムは、ディスポーザブルのチップコームが付いた永久磁石ロッドを使用して溶液からビーズを回収し、次のウェル（各ウェルは分離の次のステップのための試薬を含む）にリリースします。この非常に効果的なビーズ回収および移送メソッドにより、クリーンな抽出、効率的な結果、およびサンプルの保存を実現できます。KingFisher機器はシンプルなプロセス（結合、洗浄、溶出）を使用し、ビーズに結合できる対象物質であれば、困難なサンプルからでも抽出を自動化できます。

液体ではなくビーズを移動すると、ターゲットではない有機物や液体試薬からの汚染物質がウェル間で移送されないため、高純度の結果を得られます。また、ターゲットの核酸が付着したビーズが溶液中に残らないようにプロトコルを最適化できるため、サンプルの損失を最小限に抑えられ、結果として収量が向上します。

 

手動でのサンプル調製やサンプルの損失は一貫性のないサンプルにつながり、これは外れ値やより大きな誤差としてデータに現れます。qPCR、NGS、デジタルPCR、および質量分析などのハイエンドのダウンストリームアプリケーションは、これらの一貫性の欠如からの影響を強く受ける可能性があります。KingFisherの機器はユーザーの処理エラーを低減しながら、結果の再現性を向上させます。当社のデータでは、KingFisher機器で処理されたサンプルは、ラン間や異なるユーザー間で一貫した結果を提供することが示されています。

より速く、より少ない操作

KingFisher機器は、手動のステップを排除し全体的な処理時間を短縮することで、手動調製や他のサンプル調製機器との比較においても、貴重な時間の節約に役立ちます、これはークフローの効率を向上させるだけでなく、潜在的に感染性のあるサンプルへの接触も低減します。

 

KingFisherの自動化では、ワークフローの各ステップ—試薬、抗体、ターゲット捕捉、洗浄、および溶出など—は、機器の回転するプレート台座の中のプレート1枚（KingFisher Duo Primeの場合はプレートのウェル行）に相当します。プレートを調製しロードしたら、Start（スタート）ボタンを押すだけで、機器はプログラムされたプロトコルを自動的に実行します。各ステップが完了するとプレート台座が回転し、次のプレートをマグネットヘッドとチップコームの下に移動させます。

 

KingFisher Flexシステムは、96ウェルプレートからウイルスRNAをわずか25分で分離できます。1～4台のFlex機器を使用する一般的なラボは、1日（8時間）あたり1,000～4,000個のサンプルを容易に処理できます。高度に自動化されたKingFisher Presto機器は同数のサンプルを処理できますが、ラボスタッフが注意する必要は非常に低くなります。 

幅広いアプリケーションに対応した多用途性

KingFisherシステムは、さまざまなサンプルタイプから核酸、タンパク質、および細胞を穏やかにかつ効率的に分離・精製し、さまざまなダウンストリームアプリケーションに対応します。

 

さまざまな化学的特性が複数のサンプルタイプに対応。KingFisherシステムには、血液、唾液、粘液、海水、土壌、糞便、魚鱗、およびその他のサンプルタイプなど、困難なサンプルでも処理できる柔軟性を備えています。KingFisherシステムは、非常に広範囲のアプリケーション用にサンプルを調製できます。

 

分析物質を抽出する際、異なるサンプルタイプやアプリケーションには異なる化学的特性が必要です。当社はシンプルな選択と使いやすさを実現するため、最適化されたビーズ、バッファー、およびプロトコルを含むキットとソリューションを開発し、各アプリケーションやサンプルタイプで純度と収量を最大化させます。キット、試薬、およびプロトコルの選択ページには、これらのアプリケーションやキットの詳細が記載されていますが、ここでいくつかの特長をご紹介します。

 

最適化された核酸抽出を実現するMagMAXキット。KingFisherシステムを使用したDNAおよびRNAの自動抽出には、Applied Biosystems MagMAXキットが最適な試薬です。たとえばMagMAX Viral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kitsは、スワブや他のサンプルタイプからRNAを抽出し精製するのに使用できます。よく使用されている他のMagMAXキットは、さまざまなサンプルからゲノムDNA（gDNA）を、リキッドバイオプシー用に循環セルフリーDNAを、臨床がん研究用にホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）サンプルからDNAおよびRNAを、遺伝子発現研究用にトータルRNAおよびmiRNAを抽出するのに役立ちます。

 

他のターゲット用DynabeadsおよびSMART Digestキット。KingFisher機器では、他の核酸、タンパク質、および細胞構造の捕捉と分離にInvitrogen Dynabeads磁気ビーズまたはThermo Scientific SMART Digestキットを使用できます。たとえば、詳細なペプチドマッピングおよび特性評価のために、SMART Digestキットを使用してモノクローナル抗体やタンパク質の消化を自動化できます。KingFisher機器とDynabeads磁気ビーズを組み合わせて、フローサイトメトリーまたはウェスタンブロット法を用いたダウンストリーム解析用にCD9+腫瘍由来エキソソームを捕捉できます。

 

すべてのキットと多くの試薬には、KingFisher機器用に最適化された、変更可能なプロトコルが含まれます。アプリケーションに適したキットと試薬を探すには、キット、試薬、およびプロトコルのタブを参照するか、当社の選択ガイドをご利用ください。お客様の特定のアプリケーションニーズに合わせて試薬をカスタマイズしたり、プロトコルを開発する際にサポートがご必要な場合は、当社のフィールドアプリケーションスペシャリストおよびテクニカルセールススペシャリストがお手伝いいたします。

最適化された完全なDynabeadsベースのシステム

KingFisherサンプル調製機器は、MagMAX核酸精製キット、Dynabeads試薬、KingFisherプレートおよびプラスチック製品との併用に最適化されています。これらの製品は厳格な基準に準拠して設計および製造されており、それらの製品用に開発されたプロトコルは、試験、改良、および検証済みです。これらの製品とプロトコルを一緒に使用すると、機器の性能、結果の純度、収率、およびサンプルの完全性に自信が持てます。

KingFisherシステムは、MagMAXキット、Dynabeads試薬、KingFisherプレートおよびプラスチック製品との併用に最適化されています。

 

Dynabeads磁気ビーズ試薬（これはMagMAX精製キットにも含まれる）の最適化は、一貫した結合と信頼性の高い結果を得るために重要です。Dynabeadsは超常磁性粒子であるため、磁場に置かれると磁気特性を示し、磁場から取り除かれると残留磁気はありません。この粒子は細胞や分子に優しく、カラムや遠心分離を使用することなく、チューブやプレートの生物学的サンプルから直接ターゲットを捕捉します。

当社のビデオをご覧になり、自然の細胞プロセスの研究には、マイクロサイズのDynabeads磁気ビーズの方がナノサイズの磁気「マイクロビーズ」よりも適している理由をご確認ください。（7:21）

厳格に管理されたDynabeadsの製造プロセスは、均一な球形、サイズ、および平滑度の磁気ビーズを生産します。各実験で同じ表面積を得られるため、信頼性と再現性がより高い結果を実現できます。

 

 

Dynabeads磁気ビーズは規定された表面を有するため、必要な結合を実行し、不要なタンパク質をトラップする内部表面はありません。A. Dynabeads製品は非常に均一な単分散超常磁気ビーズで、高度に制御された製品品質で製造されているため、最高レベルの再現性を確保します。B、C、D.他社の磁気ビーズは形状やサイズにバラツキがあるため不純物を捕捉し、その結果、再現性が低くなり、非特異的結合が増加します。

 

この最適化により、KingFisherシステムには実験やプロセスの要件に合わせてワークフローを自由に変更したり、カスタマイズできる柔軟性があります。機器には以下のような特長があります：

  • スループットの選択：モデルによって、1回のランあたり6～96サンプルを処理
  • 交換可能なフォーマット：24または96ウェルの標準またはディープウェルプレートを選択できるため、20～1,000 µLのインプット容量を処理可能
  • 交換可能なマグネットヘッド：選択したプレートフォーマットに最適にフィット
  • プロトコルのカスタマイズ：BindItソフトウェアで、プロトコルを簡単に編集、変更、または新規作成

ダウンロード可能でカスタマイズ可能なプロトコル

KingFisherシステムがお客様の変化する研究ニーズに確実に適応できるよう、Thermo Scientific BindIt／BindIxソフトウェアはすべての KingFisher機器に無料で付属しています。

 

このソフトウェアを使用すると、PCで独自のプロトコルを作成、変更、保存し、そのプロトコルKingFisher機器に転送して、ラン中に機器の画面上で実行を追跡できます。また、プロトコルのあらゆる工程—結合、洗浄、および溶出—のステップやパラメーターを定義したり編集でき、さらにプレートのレイアウト上でKingFisherプレートや試薬を決定できます。手動プロトコルを開発済みの場合は、ほんの数分で自動プロトコルに変換できます。

 

MagMAXおよびDynabeads核酸分離キット、DynabeadsおよびSMART Digestタンパク質精製製品用のプロトコルをご利用になれます。機器にロードしたら、プロトコルを変更して保存し、後に再利用できます。

鼻咽頭スワブサンプルのSARS-CoV-2検査用に合理化されたプロトコルは、4つのウイルスRNAターゲットの分離において、標準プロトコルと同等に効率的でした。

習得が容易で、使用がシンプル

KingFisherシステムは、設置、習得、および使用が容易になるように設計されています。ほとんどの場合、10分以内に実行の準備が完了します。また、ラボ要件に合わせて機器をカスタマイズすることも可能です。

 

ワークフローもシンプルです。セットアップが完了したら、機器の画面上で実行したいプロトコルまでスクロールし、各プレートの調製とロードの方法を示したステップバイステップの指示に従うだけです。そして、Start（スタート）を押すと、ランが開始します。（機器が自動的にプロトコルに従って実行している間、その場を離れることもできます。）必要に応じて、ステップの時間や混合回数などのプロトコルを画面上でカスタマイズできます。

 

KingFisherによるサンプル調製がいかにシンプルであるかを理解するための最良の方法は、実際に動作しているところを見ることです。お客様のラボでお客様自身のサンプルを使用したライブデモ、またはお客様のラボに合わせて当社がカスタマイズするバーチャルデモをスケジュールされることを勧めします。お客様が体験されることの一部を知っていただくために、当社のデモビデオをご覧ください。

ライブまたはバーチャルデモでは、このビデオで説明されているように、KingFisherによるサンプル調製がシンプルであることをご紹介します。（27:28）

KingFisherデモをラボでご覧になったお客様のほとんどは、特定のアプリケーション用に機器を購入されています。しかし、ラボに設置して、いかに本当に簡単であるかをお分かりになると、しばしば他の用途を見つけられ、機器はラボの真の主力要素になります。

さまざまなサンプル調製ワークフローによる、人為的SARS-CoV-2陽性鼻咽頭スワブサンプルのCt値。鼻咽頭スワブ試料に250コピー／mL（左）または750コピー／mL（右）のSARS-CoV-2ウイルスRNA （それぞれ検出限界の1倍または3倍）を添加し、添加サンプル200 µLまたは400 µLからRNAをMagMAX Viral/Pathogen Kitを使用して、3回目の洗浄あり（+）またはなし（–）で、3重複で抽出しました。サンプルを50 µLで溶出した後、4つのRNAターゲット（色付き記号）について、qRT-PCRにより3回ずつでアッセイしました。各ターゲットのCt値は一貫性が非常に高く（記号が密接に集合）、サンプル量と洗浄条件の間でほぼ同一でした。すべての陰性サンプルのCtは「未検出」でした（データ省略）。