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DNA のメチル化は、X 染色体の不活化や染色体の安定性、クロマチン構造、胚の発生、転写など、さまさまな細胞プロセスの調節に関与しています。 バイサルファイト シーケンシングは、メチル化イベントを直接検出できる唯一の配列解析法であり、対象領域全体の情報も収集できるため、メチル化解析のバリデーションにおけるゴールド スタンダードとして活用されています。 このプロセスの鍵となるステップのひとつは、バイサルファイトによる DNA の変換です。非メチル化シトシンをすべてウラシルに変換することによって、対象領域のメチル化が正確に解析できます(メチル化されたシトシンは変換されません)。

メチル化解析には、次の 2 種類のシーケンシング ワークフローを使用できます。

  • バイサルファイト特異的な PCR ベースのシーケンシング 
    この手法は、目的とする生物学的過程に大きな影響を与えている CpG ジヌクレオチドを特定するために使用します。 フラグメント プールを直接 PCR シーケンシングすることによって、どの CpG ジヌクレオチドが変換されたか(定性的に)測定します。
  • バイサルファイト特異的なクローニング ベースのシーケンシング 
    この手法は、フラグメントの集合体をクローニングによって分類し、定量的結果を提供します。 この解析法は、対象領域に含まれる特定の CpG ジヌクレオチドがどの程度の割合でメチル化しているかを算出するためのものです。

メチル化解析の手順

DNA 精製キット

DNA の抽出は、DNA シーケンシング ベースのメチル化解析ワークフローにおける重要な第一ステップです。 DNA の配列解析における全体的な読み取りの品質と精度、長さは、サンプル自体の特性と核酸抽出法に大きく左右される可能性があります。 最適な抽出法は、サンプル源や組織の種類、サンプルの入手方法、抽出前の取り扱いもしくは保存方法によって異なります。

推奨製品: DNA単離法

Cells-to-CpG™ Bisulfite Conversion Kit

Bisulfite Conversion Kits は、DNA サンプルに含まれる非メチル化シトシン(C)をウラシル(U)に変換します。 メチル化されたシトシンは変換されません。 バイサルファイト処理した DNA の配列を未処理の DNA と比較することでシトシンの変換を検出し(T 塩基として検出されます)、サンプルに含まれるどの CpG ジヌクレオチドのシトシンがメチル化されているかを特定します。

推奨製品: バイサルファイト処理の実行

PCR キット

メチル化マッピングのための高品質 PCR プライマーを設計します。 お客様はプライマー設計ソフトウェアに対象領域をカット&ペーストするだけです。 このツールが CpG アイランドを検索し、in silico で DNA のバイサルファイト処理をシミュレーションします。 PCR を実行し、目的の領域を増幅します。 バイサルファイト処理した DNA の増幅産物は、フラグメント解析や配列解析が可能です。

推奨製品: シーケンシング反応の実行

推奨製品: シーケンシング反応の精製またはフラグメント解析のためのサンプルの調製

お客様に最適な製品とは?

キャピラリ電気泳動

キャピラリ電気泳動の際、PCR 産物はポリマーを充填したキャピラリに電気的にインジェクションされます。 蛍光標識した DNA フラグメントに高い電圧をかけてサイズ別に分離し、レーザーとカメラのシステムで検出します。

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お客様に最適な電気泳動装置(ジェネティック アナライザ)とは?

  機器
 3730xl
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キャピラリ本数96482481641
互換性のあるアプリケーション:
(S) サポート済み、(A) AB が証明済み、(C) お客様が証明済み、(N) サポートなし
メチル化SSSSSSC
DNA 精製キット

DNA の抽出は、DNA シーケンシング ベースのメチル化解析ワークフローにおける重要な第一ステップです。 DNA の配列解析における全体的な読み取りの品質と精度、長さは、サンプル自体の特性と核酸抽出法に大きく左右される可能性があります。 最適な抽出法は、サンプル源や組織の種類、サンプルの入手方法、抽出前の取り扱いもしくは保存方法によって異なります。

推奨製品: DNA単離法

Cells-to-CpG™ Bisulfite Conversion Kit

Bisulfite Conversion Kits は、DNA サンプルに含まれる非メチル化シトシン(C)をウラシル(U)に変換します。 メチル化されたシトシンは変換されません。 バイサルファイト処理した DNA の配列を未処理の DNA と比較することでシトシンの変換を検出し(T 塩基として検出されます)、サンプルに含まれるどの CpG ジヌクレオチドのシトシンがメチル化されているかを特定します。

推奨製品: バイサルファイト処理の実行

PCR キット

メチル化マッピングのための高品質 PCR プライマーを設計します。 お客様はプライマー設計ソフトウェアに対象領域をカット&ペーストするだけです。 このツールが CpG アイランドを検索し、in silico で DNA のバイサルファイト処理をシミュレーションします。 PCR を実行し、目的の領域を増幅します。 バイサルファイト処理した DNA の増幅産物は、フラグメント解析や配列解析が可能です。

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互換性のあるアプリケーション:
(S) サポート済み、(A) AB が証明済み、(C) お客様が証明済み、(N) サポートなし
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DNA 精製キット

DNA の抽出は、DNA シーケンシング ベースのメチル化解析ワークフローにおける重要な第一ステップです。 DNA の配列解析における全体的な読み取りの品質と精度、長さは、サンプル自体の特性と核酸抽出法に大きく左右される可能性があります。 最適な抽出法は、サンプル源や組織の種類、サンプルの入手方法、抽出前の取り扱いもしくは保存方法によって異なります。

推奨製品: DNA単離法

Cells-to-CpG™ Bisulfite Conversion Kit

Bisulfite Conversion Kits は、DNA サンプルに含まれる非メチル化シトシン(C)をウラシル(U)に変換します。 メチル化されたシトシンは変換されません。 バイサルファイト処理した DNA の配列を未処理の DNA と比較することでシトシンの変換を検出し(T 塩基として検出されます)、サンプルに含まれるどの CpG ジヌクレオチドのシトシンがメチル化されているかを特定します。

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PCR キット

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