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培養培地および血清
培養培地は細胞増殖に必要な栄養素、成長因子およびホルモンを供給するほか、培養物の pH および浸透圧を調節することから、培養環境の最も重要な構成要素です。
初期の細胞培養実験は組織抽出物および体液から得られた天然培地を使用して行われましたが、標準化の必要性、培地の品質および需要の増大が合成培地の開発につながりました。培地の三つの基本的クラスは、基礎培地、低血清培地、および無血清培地であり、これらの培地は血清添加の必要性の面が異なります。
基礎培地
細胞株の大部分は、アミノ酸、ビタミン、無機塩およびグルコースのような炭素源を含む基礎培地でよく増殖しますが、このような基礎培地の組成にはさらに血清を添加しなければなりません。
細胞培養培地のベストプラクティス
細胞培養培地の最適なパフォーマンスを確実に維持するために役立ついくつかの簡単なヒントやコツがあります。
冷蔵している場合、使用前に細胞培養培地を温めます。細胞は 2 ～ 8℃では冷たいため、細胞も温めることになります！
細胞培養培地を光から保護します。光に曝露されると、細胞の成長に必要な培地中の必須ビタミンが分解されます。
細胞培養培地に FBS を添加したら、完全培地を冷蔵庫（2 ～ 8℃）に入れパフォーマンスを維持します。
汚染の可能性および pH 変動の影響を低減させるため、添加済みの培地は 2 ～ 4 週間以内に使用します。
血清
血清は基礎培地で細胞を培養するための成長因子、接着因子、ホルモン、脂質およびミネラルの供給源として極めて重要です。 さらに、血清は細胞膜の浸透性も調節し、脂質、酵素、微量栄養素、および微量元素を細胞に運搬する役割を果たします。しかし、培地に血清を使用すると、高コスト、標準化に関する問題、特異性、変動性、特定の細胞培養における増殖または細胞機能の刺激または抑制といった望ましくない影響など、多くの不都合が生じます。血清を信頼できる供給源から入手しなかった場合、汚染もまた、細胞培養実験の成功に対して深刻な脅威となります。この脅威に対処するために、血清を含むすべての Invitrogen 製品および Gibco 製品は、汚染について検査しており、品質、安全性、一貫性および規制遵守を保証します。
低血清培地
細胞培養実験で血清の望ましくない作用を低減させるもうひとつの戦略は、低血清培地を用いることです。低血清培地は、栄養素および動物由来因子で補強した基礎培地で、必要な血清の量が少なくなります。
無血清培地
無血清培地（SFM）は、血清の代わりに適切な栄養素およびホルモン製剤を使用することで動物血清の使用に伴う問題を回避します。無血清培地製剤は、チャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO）の組み換えタンパク質産生株、さまざまなハイブリドーマ細胞株、昆虫細胞株 Sf9 および Sf21（Spodoptera frugiperda）、ウイルス産生の宿主として機能する細胞株（293、VERO、MDCK、MDBK など）を含む多くの初代培養物および細胞株に使用されています。無血清培養を使用する主な利点のひとつは、成長因子の適切な組み合わせの選択により、特定の細胞タイプに対して選択性を培地に持たせることが可能になります。以下の表に無血清培地の利点と欠点を示します。
利点
- 明確さが増大
- より一貫したパフォーマンス
- 精製およびダウンストリームプロセスがより簡単
- 細胞機能を正確に評価
- 生産性の向上
- 生理学的反応の制御の向上
- 細胞メディエーターの検出の強化
欠点
- 細胞タイプに特異的な培地調製が必要
- より高い純度の試薬が必要
- 成長が遅い
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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.