AmpliTaq Gold DNA Polymerase | Thermo Fisher Scientific

Applied Biosystems AmpliTaq Gold 및 AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase는 실온에서 효소 활성을 억제하기 위해 화학적 수정을 활용한 hot-start 효소입니다. 불활성화되어 있는 polymerase가 온도가 올라가면서 항체가 떨어지면 활성화되어 프라이머 어닐링 온도보다 높은 온도에서 활성을 나타내는 효소가 됩니다. 따라서 특이도가 높은 프라이밍 특성을 가진 산물인 경우에만 확장 및 증폭됩니다.

이 페이지의 내용

AmpliTaq Gold 제품 종류
장점 – 활용성, 감도 및 고품질 염기서열분석(sequencing) 데이터
주문 정보
리소스-제품 설명서, PCR 교육, PCR 지원 센터 등

AmpliTaq Gold 제품 종류

두 종류 모두 hot-start 반응용으로 설계되었지만 AmpliTaq Gold 360 polymerase는 GC-rich 템플릿을 더 잘 처리하고 배송, 보관 및 취급 시 높은 유연성을 제공하기 때문에 더욱 활용성이 좋습니다.

	AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase¹	AmpliTaq Gold DNA Polymerase
hot-start 변형	화학물질	화학물질
앰플리콘 길이	최대 5kb	최대 5kb
중합효소 활성화 단계	95°C에서 10분	95°C에서 10분
GC-rich 염기 서열 증폭	예	아니오
독립형 효소	10X AmpliTaq Gold 360 Buffer, 25mM MgCl₂ 및 GC Enhancer 포함	10X PCR Gold Buffer 및 25mM MgCl₂ 포함 10X PCR Buffer I(MgCl₂ 사전 첨가) 포함 10X Buffer II 및 25mM MgCl₂ 포함
보관 온도	-20°C 또는 +4°C	-20°C
상온 배송	예	아니오
마스터 믹스 형태	예	아니오

¹ AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase는 AmpliTaq Gold DNA Polymerase와 동일한 효소지만, 추가로 정제되어 낮은 수준의 잔류 DNA를 포함하는 것으로 검증되었습니다. 인간 DNA ≤2 복제 수/10 U 및 박테리아 DNA ≤1.4 복제 수 E.coli DNA/ 5 U.

AmpliTaq Gold와 AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerases의 차이점

원래의 AmpliTaq Gold DNA Polymerase와 비교해 AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase는 추가적인 당사 고유의 분리 공정으로 정제되어 효소 제제에서 잔류 박테리아 DNA 염기 서열을 감소시켜 줍니다. 강화된 360 Gold Buffer와 함께 사용하는 경우 이러한 초순도 효소는 hot-start 특성 외에도 false positive 결과를 감소시키고, 낮은 수준의 표적 염기 서열을 증폭하며, 박테리아 및 인간 게놈에서 얻은 것을 포함한 다양한 템플릿의 증폭을 촉진합니다.

순도가 높기 때문에 AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase는 소량의 복제 표적을 효과적으로 증폭하여 소량이거나 분해된 염기 서열의 검출에 적합합니다. AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase는 최대 5 kb까지의 염기 서열을 증폭할 수 있습니다.

AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase 장점

그림 1. 광범위한 표적을 증폭하는 AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase. 이 패널은 AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase를 사용하여 증폭된 산물을 보여줍니다. PCR은 반응당 1 ng의 템플릿 DNA를 사용하여 중복 수행되었습니다. 앰플리콘의 길이는 300 ~ 1400 염기쌍(bp) 범위 내에 있습니다(평균 553 bp). 앰플리콘은 High AT, Easy Amplification, Primer Dimer, Homopolymer, Sequencing Challenge, Long 및 High GC로 라벨링됩니다. High GC 앰플리콘 반응은 5 µL의 360 GC Enhancer를 포함합니다.

그림 2. 소량의 복제 표적 검출을 위한 AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase의 감도. gel 이미지는 2.0 mM MgCl₂ 및 표준 열 순환 조건을 사용하여 0 ~ 80 복제 수의 입력 DNA로 수행된 ß-액틴 유전자의 증폭 산물을 보여줍니다.

그림 3. AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase를 사용하여 생성된 PCR 산물에서 획득한 고품질 sequencing 데이터. AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase 및 AmpliTaq Gold DNA Polymerase를 사용하여 생성된 표준(패널 A) 및 높은 GC 함량(패널 B) 표적 모두에서 얻은 증폭 산물에 대해 sequencing이 분석되었습니다(sequencing 반응당 10 ng PCR 산물). 시료는 BigDye Terminator v3.1과 표준 열 순환 조건을 사용하여 순환식 sequencing이 수행되었습니다. 순환식 sequencing 반응 클린업을 위해 BigDye XTerminator Purification Kit가 사용되었고, 시료는 POP-7 고분자와 함께 Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer로 주입되었습니다.

활용성

감도

고품질 염기서열분석(sequencing) 데이터