Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase

기존 PCR 시약을 사용하는 PCR 어세이는 프라이머 어닐링 온도와 확장 단계 지속시간이 다양하기 때문에 각 DNA 단편의 증폭을 위한 특정 프로토콜이 필요합니다. 그러므로 개별 어세이를 동일한 PCR 실행 시 증폭할 수 없습니다. Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase를 사용하면 다양한 PCR 어세이를 범용 어닐링 온도와 가장 긴 증폭 대상 단편을 위해 선택된 확장 단계를 가진 동일한 프로토콜을 사용하여 병렬로 사이클링할 수 있습니다. 또한, Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase는 “고속” DNA 중합효소이므로 이 차세대 DNA 중합효소와 범용 프로토콜을 함께 사용하면 단 30분만에 모든 어세이를 고속으로 사이클링할 수 있습니다.

그림 1. 어세이 공동 사이클링으로 시간 절약. 기존 PCR 시약을 사용하는 PCR 어세이는 프라이머 어닐링 온도와 확장 단계가 다양하기 때문에 각 DNA 단편의 증폭을 위한 특정 프로토콜이 필요합니다. 그러므로, 기존 PCR 시약의 경우 여러 표적을 동일한 PCR 실행에서 함께 증폭할 수 없는 경우가 많습니다. Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase를 사용하면 다양한 PCR 어세이를 범용 어닐링 온도와 가장 긴 증폭 대상 단편을 위해 선택된 확장 단계를 가진 하나의 프로토콜을 사용하여 함께 사이클링할 수 있습니다. 또한, Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase는 단 30분만에 PCR 결과를 얻을 수 있는 고속 DNA 중합효소입니다.

그림 2. Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase는 짧거나 긴 앰플리콘을 함께 사이클링할 수 있습니다. Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase 또는 다른 hot-start DNA 중합효소를 사용하여 132 bp, 251 bp, 1,005 bp 및 3.9 kb의 단편을 50 μL 반응의 인간 유전체 DNA 50 ng로부터 증폭했습니다. (A) NEB OneTaq Hot Start DNA Polymerase, (B) Qiagen Fast Cycling PCR Kit, (C) Roche FastStart Taq DNA Polymerase. 표시된 어닐링 및 확장 설정으로 네 개의 모든 표적에 동일한 프로토콜을 사용했습니다. 크기 마커는 Thermo Scientific ZipRuler Express DNA Ladder 2입니다.

Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase는 DNA 합성 속도가 향상된 효소입니다. 그러므로 Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase PCR 결과는 일반적으로 다른 hot-start Taq DNA 중합효소보다 2배 이상 더 빨리 얻을 수 있습니다.

그림 3. 고속 사이클링으로 PCR 실행 시간 감소. Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase와 다른 공급업체의 hot-start DNA 중합효소를 사용하여 35 사이클을 위해 50 μL 반응의 인간 유전체 DNA 50 ng로부터 529 bp 단편을 증폭했습니다. (A) Sigma-Aldrich KAPA2G Fast HotStart PCR Kit, (B) NEB OneTaq Hot Start DNA Polymerase, (C) Promega GoTaq G2 DNA Polymerase, (D) Toyobo Quick Taq HS DyeMix, (E) Roche FastStart Taq DNA Polymerase, (F) Sigma-Aldrich JumpStart Taq DNA Polymerase. 각 중합효소의 사이클링 시간은 자주색으로 표시되어 있고 ProFlex PCR System(6°C/sec 피크 블록 램프 속도)의 램핑 시간은 빨간색으로 표시되어 있습니다. 1% TAE 아가로스 겔에서의 PCR 산물 분석은 그래프 아래에 제시되어 있습니다. 크기 마커는 ZipRuler Express DNA Ladder 2입니다.

Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase의 높은 감도 덕분에 시작 물질 양이 적거나 표적 DNA가 샘플에 저농도로 존재하는 실험에서 특이적 산물을 성공적으로 증폭할 수 있습니다. 

그림 4. 적은 양의 DNA로부터 높은 민감도와 신뢰성을 보장하는 증폭. Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase 또는 경쟁사 DNA 중합효소를 사용하여 0(템플릿 제어 없음), 0.016, 0.08, 0.4, 2, 10, 50, 250 ng의 인간 유전체 DNA로부터 529 bp의 단편을 50 μL PCR 반응에서 증폭했습니다(A—KAPA2G Fast HotStart, B—NEB OneTaq Hot Start, C—Promega GoTaq G2, D—Sigma JumpStart Taq, E—Takara Taq HS Perfect Mix). 추정 복제 수는 인간 유전체 DNA 0.016 ng당 ~5개 복제입니다. 분자량 마커는 ZipRuler Express DNA Ladder 2입니다.

Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase는 억제제에 대한 저항성을 갖도록 설계되어 불충분한 순도의 샘플도 성공적으로 증폭할 수 있습니다.

그림 5. 억제제에 대한 저항성. Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase 또는 경쟁사 DNA 중합효소를 사용하여 다음을 포함한 반응 혼합물에서 인간 유전체 DNA로부터 1 kb의 단편 증폭(A—KAPA 2G Robust HotStart, B—NEB OneTaq Hot Start, C—Promega GoTaq G2, D—Takara Taq Hot Start Version): 1—humic acid(최대 최종 농도 1.3 µg/mL), 2—hemin(최대 최종 농도 6 µM), 3—xylan(최대 최종 농도 0.26 mg/mL) 또는 4—억제제 제어 없음. 분자량 마커는 ZipRuler Express DNA Ladder 2입니다.

Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase 및 2X Master Mix의 제제는 AT-rich부터 GC-rich까지 다양한 표적의 증폭을 가능하게 합니다. Platinum GC Enhancer는 특이적 증폭과 높은 GC 함량의 표적에 대한 수율 향상을 위해 별도의 병으로 제공됩니다.

Platinum II Taq Hot-start DNA Polymerase로 생성된 PCR 단편은 Sanger 염기서열분석(sequencing)에 적합합니다. 이 효소의 우수한 성능, 범용 프라이머 어닐링 및 고속 합성 덕분에 Sanger sequencing을 위한 PCR 앰플리콘을 쉽고 간편하게 생성할 수 있습니다.