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在实现有效的基因敲低方面, Lipofectamine RNAiMAX 转染试剂优于其他 siRNA 转染试剂。只需 1 nm siRNA 即可实现高敲低水平的靶基因 (图 1)。Lipofectamine RNAiMAX 方案建议使用 10 nm siRNA 作为起点,以尽可能提高敲低水平。 即使与低浓度的 siRNA 偶联, RNAiMAX 试剂也有助于获得高敲低水平,同时也有助于尽可能减少未转染细胞的背景表达,并尽可能减少其他非特异性 效应。
图1.与竞争的 siRNA 转染试剂相比, Lipofectamine RNAiMAX 转染试剂提供了出色的敲低效果。在 10 nm 和 1 nm p53 siRNA 下, Lipofectamine RNAiMAX 转染试剂相对于非转染细胞提供了更有效的敲低效果,包括 siLentFect ™ (Bio-Rad) , DharmaFECT ™ (DharmaFacon) 和 HiPerFect (Qiagen) 试剂。
转染介导的细胞毒性可以掩盖正在研究的靶基因的真正表型,因此尽可能减少转染中使用的试剂数量是成功 RNAi 实验的关键因素。
Lipofectamine RNAiMAX 转染试剂可在试剂的 10 倍浓度范围内提供极高敲低率和出色的细胞活力 (图 2)。这种广泛的最佳转染活性峰值和最小的细胞毒性意味着您可以确保在细胞密度差异、实验误差和其他变化的情况下实现高水平的基因沉默。这也使得优化 Lipofectamine RNAiMAX 试剂的过程更加简单,以获得极低的 siRNA 浓度,但还可以同时减少实验系统中的细胞应激和细胞毒性。
图 2. 使用 Lipofectamine RNAiMAX 转染试剂转染的 A549 细胞中极佳敲低效果和极低细胞毒性。μL μL 0.1 μ M 至 1.0 μ g 的 Lipofectamine RNAiMAX 试剂,可有效敲低 p53 基因表达水平,同时保持出色的细胞活力。
Lipofectamine RNAiMAX 提供了简单方案,可在许多细胞类型中实现高转染效率。无需在转染后去除 Lipofectamine siRNA 复合物或更换或添加细胞培养基。
与 Invitrogen BLOCK-iT Alexa Fluor Red 荧光对照品结合使用时, Lipofectamine RNAiMAX 试剂可为您提供所有敲低实验的极通用方法 (表 1 ,图 3)。花费更少的操作时间同时更快地获得更好的结果。
图3.使用 BLOCK-iT Alexa Fluor Red 荧光对照品提高转染效率。(A) 使用 Lipofectamine RNAiMAX 转染试剂,用 BLOCK-iT Alexa Fluor Red 荧光对照品 (50 nm) 转染 HeLa 细胞。(B) 转染后 24 小时,几乎 100% 的细胞会接受对照并保留正常形态,如亮场图像中所示。
细胞系/类型 | 细胞类型 |
---|---|
MDA-MB-435 | 乳腺癌 |
HeLa | 宫颈癌 |
HT1080 | 人纤维肉瘤 |
A549 | 肺癌 |
HepG2 | 肝癌 |
MCF7 | 乳腺癌 |
SK-N-SH | 神经母细胞瘤 |
间充质干细胞 | 骨髓 |
HAMSC | 人主动脉平滑肌细胞 |
HEKa | 人类表皮角质细胞 |
HRE | 人类肾上皮细胞 |
NVERA-2 | 胚胎性癌细胞 |
HUVEC | 人脐静脉内皮细胞 |
ADSC | 脂肪来源的干细胞 |
HCT116 | 结肠癌 |
请观看这段逐步视频,使用 Lipofectamine RNAiMAX 试剂成功转染 siRNA。
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