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KingFisher 系统可以处理核酸、蛋白质和多肽、细胞和外泌体等多种应用。
不同的样品类型和应用需要不同的化学成分才能提取分析物。例如,血液、唾液和口腔样品是长片段 DNA 的浓缩来源,而游离 DNA 样品是短片段的大体积、低浓度来源。使用不同的磁珠、不同的结合方式和缓冲化学成分,从这些来源获得最佳的 DNA 提取物。
在本节中,您可以找到专为 KingFisher 系统优化的试剂盒、试剂和方案,以最大程度提高每个提取靶标和样品类型的纯度和产量。表格总结了每种分析物和应用的建议方法。
使用我们的选择工具为您的自动化样品制备找到合适的磁珠试剂盒。MagMAX、Dynabeads 和 SMART Digest 试剂盒可以从各种样品类型中纯化核酸、 蛋白质、 细胞、外泌体 和病毒, 并专门为自动化 KingFisher 纯化系统而优化。
要分离并提取 |
我们建议 … |
DNA 和/或 RNA |
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DNA 和/或 RNA(不包括在 MagMAX 试剂盒中) |
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蛋白质 |
用于免疫沉淀的 Dynabeads 磁珠试剂盒 |
用于肽图分析的蛋白质 |
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细胞和外泌体 |
Invitrogen Dynabeads 磁珠试剂盒 |
SARS-CoV-2 |
Applied Biosystems MagMAX 试剂盒(病毒 RNA) |
使用我们的 试剂盒、试剂和方案选择指南 查找适用于您应用的合适的 MagMAX、Dynabeads 和 SMART Digest 试剂盒,或在稍后部分中通过提取靶标进行浏览。您也可以链接到任何试剂盒的产品页面,查看和下载在 KingFisher 仪器上运行的方案。
KingFisher BindIt 或 BindIx 软件随所有 KingFisher 仪器免费提供,以便您创建、 下载、运行、 修改和存储 适合您应用的方案。 该软件允许您为方案的每个部分(结合、洗涤和洗脱)定义和编辑步骤、参数、孔板和试剂。
有关任何 MagMAX 或 Dynabeads 试剂盒或各试剂盒中的试剂、试剂和方案选择指南,请单击 View Protocols(查看方案)以查看 KingFisher 仪器的自动化方案。然后按照以下步骤下载并安装所需的方案。
KingFisher BindIx 软件(用于 KingFisher APEX 系统)
方法 | 说明 |
双击下载的软件包以启动安装过程 | |
单击 Get(获取),然后单击 Install(安装) | |
来自制造商的 U 盘 | 双击 .msix 包文件,然后单击 Install(安装) |
系统要求:Windows 10 版本 1809 (17763.0) 或更高版本
2.搜索方案库查找与所用试剂盒相对应的方案。
KingFisher BindIt 软件(适用于 KingFisher Flex 和 Duo Prime 系统)
KingFisher 系统拥有该领域的前沿技术 ,可以帮助实验室增加 RNA 提取通量以满足快速及准确地大批量处理 SARS-CoV-2 检测结果的需求。 KingFisher 仪器上的 MagMAX 病毒/病原体试剂盒为 SARS-CoV-2 检测提供了一种灵敏、简单的核酸提取方法, 最近已简化了方案以进一步提升通量。
MagMAX 病毒/病原体试剂盒专为高核酸回收率而设计,并与低滴度样品兼容。对于从低到高不同起始体积的样本,只需两个方案。不需要carrie,这意味着对下游 NGS 的干扰更小,所需步骤也更少。
建议在研究实验室使用 MagMAX 病毒/病原体核酸分离试剂盒 I 和 II(MVP I 和 II)。 这两种试剂盒均已经过 新开发的简化方案进行验证,一半的提取试剂可处理 200 μL(与标准 400 μL 相比)的样品起始量。
两种 MagMAX 试剂盒在功能上是完全相同的,驱动 RNA 到磁珠上的化学作用和整个工作流程也是一样的。这两种试剂盒的区别是:(a) 由于前所未有的 SARS-CoV-2 需求,磁珠组分的原材料不同;(b) MVP II 试剂盒仅以批量制备规格提供。
从不同样品类型中分离基因组 DNA (gDNA) 过去一直需要多个纯化试剂盒。使用 MagMAX DNA Multi-Sample Ultra 2.0 试剂盒或 KingFisher Flex Ready DNA Ultra 2.0 预分装板和 KingFisher 仪器可以从 50 μL 到 2 mL 全血、唾液、血沉棕黄层、口腔拭子或其他生物样品中分离 gDNA。得到的纯化 gDNA 是许多下游分子生物学应用的理想选择,如 qPCR、NGS 和微阵列分析。
适合下游基因分析的一种 易获取、非侵入且可靠的 gDNA 来源是 唾液。MagMAX gDNA 唾液试剂盒是为一家领先的基因组公司使用 KingFisher 仪器而开发,经过专门优化可用于唾液 gDNA 分离。
使用 MagMAX DNA 多样品 Ultra 2.0 试剂盒可从小体积和大体积起始样本中提取高纯度 gDNA。该试剂盒通过使用蛋白酶 K (PK) 和 P 增强剂处理样品,然后采用创新的裂解/结合解决方案同时裂解细胞、变性蛋白质和在高结合磁珠上捕获 gDNA,从而获得最大得率。该试剂盒具有良好的灵活性,允许您跳过样品和缓冲体积的归一化步骤,进行无故障处理。例如,您可以在同一个孔板上同时运行 50µL 和 400µL 样品。
MagMAX DNA 多样品 Ultra 2.0 试剂盒也提供散装试剂,允许您处理 2,000个 50–200 µL 样品或 1,000个 200–400 µL 样品。
KingFisher Ready DNA Ultra 2.0 预分装板包含与 MagMAX DNA 多样品 Ultra 2.0 试剂盒相同的试剂,能够获得与后者相同的高质量结果,只不过这些孔板出于方便已经填充了试剂。无需分配裂解液、洗涤液和磁珠。方案操作简单:只需撕掉铝箔,添加样品和增强剂/蛋白酶 K 溶液,然后放入仪器。
将 MagMAX gDNA 唾液试剂盒与 KingFisher 仪器配合使用,以从唾液样品中获取高纯度 gDNA。该试剂盒采用创新的裂解/结合解决方案处理样品,可同时裂解细胞、变性蛋白质和在高结合磁珠上捕获 gDNA。该试剂盒具有良好的灵活性,允许您跳过样品和缓冲体积归一化步骤,进行无故障处理。例如,您可以在同一个孔板上同时运行 50µL 和 400µL 样品。该工作流程与多种唾液收集设备兼容,例如 Genotek Oragene™、IsoHelix GeneFiX™ 和 Biomatrica SalivaGard™。
从血浆、血清或尿液中提取游离 DNA (cfDNA) 或总核酸 (cfTNA) 的“液体活检”是一种检测和监测与癌症等疾病状态相关靶标的非侵入性方法。KingFisher 仪器上的 MagMAX 游离核酸试剂盒是液体活检研究的理想选择。对游离 DNA (cfDNA) 和总核酸 (cfTNA)(而非基因组 DNA (gDNA))的富集进行了优化,这意味着更高的回收率和更低的起始体积。
液体活检通常利用来自正常细胞和癌细胞的游离 DNA (cfDNA)。血液中仅肿瘤的 DNA 常称为循环肿瘤 DNA (ctDNA),其中含有通常难以获取的有关某种肿瘤的信息。在这些试剂盒中,磁珠和经过优化的化学试剂相结合,可更高效地分离核酸,特异性回收小片段 cfDNA 并留下较大的 DNA 分子。对总核酸中 cfDNA 的富集确保了较短的片段化 ctDNA 得到浓缩,为下游的 qPCR、数字 PCR (dPCR) 或二代测序技术 (NGS) 做好准备。
虽然 cfDNA 变得越来越重要,但它可能并不能说明问题的全部。cfRNA 序列可以作为 microRNA 和基因融合的关键生物标记物。总核酸试剂盒内 cfDNA 与 cfRNA 结合使用为研究人员提供了扩展研究和促进人类健康的机会。
将 MagMAX 游离 DNA 分离试剂盒与 KingFisher 仪器、Oncomine 检测和其他下游应用配合使用,可优化从提取、纯化到分析的液体活检工作流程。
使用 MagMAX 游离总核酸分离试剂盒可扩展您的液体活检工作流程,从同一样品中同时包含游离 DNA 和 RNA (cfRNA)。
关于这些 MagMAX 试剂盒的性能数据、应用说明和详细的方案信息,请访问以上了解更多链接。
要查看 KingFisher 仪器所用的 MagMAX 游离 DNA 分离试剂盒的工作流程视频,请访问以上货号链接。
有关与 KingFisher 仪器配套使用的塑料耗材和用于孔板制备的产品的信息,请参阅附件选项卡。
临床癌症研究样本通常采用福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 用于组织病理学分析和组织存档。该方法可保留组织并可长期储存,但大量的核酸化学交联会使下游应用处理(如二代测序 (NGS))变得复杂。
使用 MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra 试剂盒和 KingFisher 仪器,您可以从 FFPE 和固定样品中按顺序分离 DNA、RNA、microRNA 或同时分离 DNA 和 RNA。提取的基因组 DNA (gDNA) 质量高,产量可与新鲜冷冻血液相当。该试剂盒非常适合用于 Ion Torrent™ Oncomine™ 游离核酸检测以及 PCR 和 NGS,即使超过 25 年历史的 FFPE 组织也同样适用。
使用 MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra 试剂盒从 FFPE 样品中快速、可靠地分离核酸。您甚至可以在单个工作流程中依次从同一样品中提取 DNA 和 RNA,以从宝贵的样品中获取更丰富的数据。例如,您可以研究重要的生物标记物,如热点突变、CNV、基因融合和插入缺失。
该试剂盒经过多种研究型样品验证,包括实体肿瘤活检、芯针活检和细针穿刺活检。它还与 CitriSolv™ 清除剂兼容,这是一种毒性较低可以不适用化学通风柜的二甲苯脱蜡替代物。
要加速脱蜡过程,请将 FFPE DNA/RNA Ultra 试剂盒与 Applied Biosystems™ AutoLys™ 系统配套使用。AutoLys 由预处理管和机架系统组成,以减少移液步骤,试管和附件消除了对危险化学品的需要,并最大限度地减少了组织样品的损失。
从不同样品类型中分离不同类型的 RNA 以进行基因表达研究过去一直需要多个纯化试剂盒。MagMAX mirVana 总 RNA 分离试剂盒已经过优化,能够从大多数生物样品(包括血浆/血清、全血、固体组织、培养细胞、尿液等)中提取总 RNA,包括小 RNA 和 microRNA (miRNA)。提取不含酚和有机物。
使用 MagMAX mirVana 总 RNA 分离试剂盒进行低通量或高通量的真总 RNA 分离,涵盖细胞中存在的所有 RNA 类型,从小 RNA(如 microRNA (miRNA))到非编码 RNA、信使 RNA 和核糖体 RNA。该试剂盒可以在低至 20 µL 的无核酸酶水中对高浓度 RNA 进行洗脱,其化学特性稳定并可长时间保留 RNA。
提取出的 RNA 适用于一系列下游基因表达应用,例如 miRNA-Seq 和 qRT-PCR。TaqMan™ 高级 miRNA cDNA 合成试剂盒和其他 TaqMan 高级 miRNA 检测的工作流程已经验证。
有关此 MagMAX 试剂盒的性能数据,请访问以上了解更多链接。
关于此 MagMAX 试剂盒的方案信息和应用说明,或要查看该试剂盒的工作流程视频(仅限手动分离),请访问以上货号链接。
有关与 KingFisher 仪器配套使用的塑料耗材和用于孔板制备的产品的信息,请参阅附件选项卡。
转录组学研究需要信使 RNA (mRNA),可以来源于多种样本。Dynabeads mRNA 分离磁珠利用大多数 mRNA 3' 末端的 polyA 残基与共价偶联到 Dynabeads 表面的 Oligo(dT)25 残基之间的碱基配对来特异性捕获多种粗样品中的 mRNA 分子。KingFisher 仪器上的自动化方案仅需 15 分钟,分离出的 mRNA 可用于所有下游应用。
Dynabeads mRNA 纯化试剂盒可以将总 RNA 作为起始物,当您已经分离出总 RNA 时(例如从 MagMAX mirVana 总 RNA 分离试剂盒中),这是一个好的选择。
然而,实际上 mRNA 含量仅占细胞总 RNA 的1-5%。如果您只需要 mRNA 转录组,则无需分离总 RNA。Dynabeads mRNA DIRECT™ 纯化试剂盒和技术仅针对各种粗样品中的 mRNA 分子,可将其直接从溶液中提取出来。核糖体 RNA、DNA、蛋白质和小 RNA 分子(如转移 RNA、微量 RNA 和小核仁 RNA)不会与磁珠结合,被丢弃。
使用这三种试剂盒,您可以在磁珠上直接合成 互补 DNA (cDNA) 以创建可重复使用的固相 cDNA 库,甚至可以直接在磁珠结合的 cDNA 上进行 qRT-PCR,从而对整个转录组进行灵敏的定量分析,直至单个分离细胞的水平。当您已经纯化总 RNA 时,使用 Dynabeads mRNA 纯化试剂盒分离 mRNA。
使用 Dynabeads mRNA DIRECT 纯化试剂盒从几乎任何脊椎动物、无脊椎动物、植物、真菌或细菌来源的粗裂解物中直接分离 mRNA。这项灵敏的技术可以实现从小到单个细胞的样品进行 cDNA 合成和 cDNA 库构建。
Dynabeads mRNA DIRECT 微量纯化试剂盒可处理与 mRNA DIRECT 纯化试剂盒相同的应用,但专门针对 10,000 个细胞、5 mg 组织或更少的微量样品进行了优化。
检测人类体液中的病毒对于传染病研究和管理至关重要。病毒载量检测可用于评估抗病毒疗法的疗效、并监测疾病进展和揭示在早期阶段是否存在感染。在 KingFisher 仪器上使用 MagMAX 病毒/病原体试剂盒为从包含病毒或其他病原体的样品中提取核酸提供了一种灵敏且简单的方法。
注意:有关使用 MagMAX 病毒/病原体试剂盒进行 SARS-CoV-2 检测的具体信息,请参阅以上 SARS-CoV-2 检测 。
MagMAX 病毒/病原体试剂盒专为高核酸回收率而设计,并与低滴度样品兼容。对于从低到高不同起始体积的样本,只需两个方案。不需要carrier,这意味着对下游 NGS 的干扰更小,所需步骤也更少。
MagMAX 病毒/病原体核酸分离试剂盒为从含有病毒和革兰氏阴性菌的样品中提取 RNA 和 DNA 提供了一种灵敏而简单的方法,从多种样品类型中成功检测出低至 50 个拷贝证明了这一点。
MagMAX 病毒/病原体 Ultra 核酸分离试剂盒 (A42356) 包含与标准病毒/病原体核酸分离试剂盒相同的试剂,还包含了从革兰氏阳性菌、酵母菌和真菌等复杂病原体中裂解并回收核酸所需的额外酶混合物。该试剂盒可用于未知病原体的广泛检测和鉴定,包括难以检测的呼吸道微生物。由于病毒 RNA 分离不需要额外的酶,因此不建议采用本试剂盒进行 SARS-CoV-2 检测。
注意:如果您需要分离 SARS-CoV-2 RNA,请确保订购 MagMAX 病毒/病原体 II (MVPII) 核酸分离试剂盒(货号:A48383R),而非 MagMAX 病毒/病原体 Ultra 核酸分离试剂盒(货号 A42356)。Ultra 版本包含用于裂解革兰氏阳性菌和真菌的额外酶混合物(并非 SARS-CoV-2 RNA 分离所必须)。
关于这些 MagMAX 试剂盒的性能数据、应用说明和详细的方案信息,请访问其了解更多或以上货号链接。
要查看 KingFisher 仪器所用 MagMAX 病毒/病原体核酸分离试剂盒的工作流程视频,请访问以上货号链接。
有关与 KingFisher 仪器配套使用的塑料耗材和用于孔板制备的产品的信息,请参阅 附件选项卡。
人类微生物组在疾病诊断和治疗方面已成为关键因素,但对微生物的鉴定和定量却成为了一项重大挑战。尽管宏基因组测序技术可以在环境样本中提供所有基因的全面分析,但该技术需要足够的纯净且高质量的 DNA 和 RNA 样本。MagMAX 微生物组 Ultra 核酸分离试剂盒 和 KingFisher 仪器可以以高效、自动化的工作流程提供样品。
人类微生物组既复杂又多面,并且每个人体微生物群都具有不同的显性特征分类群。肠道包含与人体相关的大部分微生物群,是人体研究最彻底的生态系统之一。粪便样本通常用于这些分析,因为它们易于获得且含有大量生物量。唾液和尿液等体液的研究较少,但每种液体都含有独特的细菌群落。
使用 MagMAX 微生物组 Ultra 核酸分离试剂盒从粪便、尿液、唾液以及其他样品中分离总核酸。本产品可提取高产量、高纯度、高质量和无抑制剂的 DNA 和 RNA,特别适合用于宏基因组研究和其他下游应用。酶消化可以从各种微生物中回收核酸,无需额外的处理步骤。
该试剂盒可分离病毒和细菌核酸,并已通过哺乳动物、爬行动物、鱼类和鸟类粪便样本、VTM、皮肤和乳样、以及酵母和细菌培养物进行了测试。建议用于正在开发自己的微生物组检测方法并需要分离总核酸的低通量和/或高通量解决方案的研究实验室。
有关此 MagMAX 试剂盒的性能数据和应用说明,请访问以上了解更多链接。
有关此 MagMAX 试剂盒的方案信息,请访问其以上货号链接之一。
有关与 KingFisher 仪器配套使用的塑料耗材和用于孔板制备的产品的信息,请参阅附件选项卡
废水和污水监测是监测病毒和细菌病原体区域传播的有用工具。在不同的操作层面 (如大学宿舍或整个城市) 进行监测已被证明是在SARS-CoV-2病毒在人群中广泛传播之前检测到它的可靠方法。污水监测可用于监测其他病毒靶标,如流感和诺如病毒。MagMAX污水试剂盒提供了一种高效、简单的方法,从废水、污水或污泥样品中提取高质量的核酸,用于疾病监测工作流程。纯化的DNA和RNA非常适合用于各种下游应用,如qPCR,数字PCR或NGS。
MagMAX Ultra污水核酸分离试剂盒是一种自动化兼容的提取试剂盒,用于从废水、污水和污泥中提取病毒核酸。有具有Applied Biosystems Dynabeads污水病毒富集磁珠的版本可用于浓缩污水样品。
MagMAX Ultra污水核酸分离试剂盒 (货号:A52606) 有助于实现从200µL到500 mL污水样品的高效、高通量核酸提取。该试剂盒还与通过超离心或沉淀浓缩的样品或非浓缩样品兼容,旨在确保高质量核酸的可重复性回收,与实时PCR和NGS等广泛应用兼容。
MagMAX Ultra污水核酸分离和病毒富集试剂盒 (货号:A52610) 采用Dynabeads和MagMAX磁珠技术,允许自动富集病毒。最多可处理10 mL污水,先浓缩病毒再进行提取。
有关污水监测检测传染病的更多信息,请点击上面的“了解更多”链接。
有关这些MagMAX试剂盒的方案信息,请遵循上面的货号链接。
有关与KingFisher仪器一起使用的塑料耗材和板设置产品的信息,请参阅附件选项卡。
从植物中提取 DNA 和 RNA 在处理植物组织中富含的糖类、酚类和其他化合物时具有特殊的挑战。MagMAX™ 植物 DNA 分离试剂盒使用 KingFisher 自动化仪器,可从各种植物物种和组织类型中分离核酸。
植物细胞壁很难破坏,裂解物通常含有大量化合物,如单宁、酚类和复杂的多糖,此类化合物会影响核酸质量并抑制下游反应。尽管面临这些挑战,这些 MagMAX 试剂盒仍可以有效地从各种植物样品(如拟南芥、灯笼椒叶、蓖麻/菜籽叶、玉米叶、绿洋葱、柠檬叶、燕麦叶、橙子、松针、菠菜叶、西红柿叶和芽草叶)中分离 DNA 或 RNA。
将 MagMAX 植物 DNA 和 RNA 试剂盒与 KingFisher 仪器配合使用,从各种植物物种和组织类型(包括植物真菌)中自动纯化 DNA 和 RNA。经过纯化的 DNA 或 RNA 不含蛋白质、核酸酶和其他污染物、抑制剂和核酸,可用于各种下游应用,如 PCR、qPCR 和 NGS。该试剂盒针对 10–100 mg 植物样品中的 DNA 和 RNA 进行了优化。
免疫沉淀 (IP) 或免疫共沉淀 (co-IP) 可用于从含有成千上万种不同蛋白的样品中分离和浓缩特定蛋白或蛋白复合物。Dynabeads 磁珠试剂盒可最大程度提高产量和重复性并最大限度减少非特异性结合,已成为用磁珠进行免疫沉淀反应的黄金标准。现在有了适用于 KingFisher 仪器的自动化方案,您可以在 40 分钟内完成蛋白质检测和分析,只需最少的手动操作时间。
使用这些 Dynabeads 试剂盒和产品用于直接和间接免疫沉淀的自动化方案。
产品 |
Dynabeads 体积 |
检测次数 |
货号 |
Dynabeads 蛋白 A 磁珠 |
1 mL |
20 |
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5 mL |
100 |
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50 mL |
1000 |
||
Dynabeads 蛋白 A 免疫沉淀试剂盒 |
2 mL |
40 |
|
Dynabeads 蛋白 G 磁珠 |
1 mL |
20 |
|
5 mL |
100 |
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50 mL |
1000 |
||
Dynabeads 蛋白 G 免疫沉淀试剂盒 |
2 mL |
40 |
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Dynabeads M-280 羊抗鼠 IgG 磁珠 |
2 mL |
40 |
|
10 mL |
200 |
||
Dynabeads M-280 羊抗兔 IgG 磁珠 |
2 mL |
40 |
|
10 mL |
200 |
||
Dynabeads M-280 链霉亲和素磁珠 |
2 mL |
40 |
|
10 mL |
200 |
||
100 mL |
2000 |
IP 过程有两种。如果靶蛋白丰度高,您可以使用直接方法,即将第一抗体 (Ab) 首先与 Dynabeads 磁珠一起孵育,然后通过洗涤去除未结合的抗体。然后将结合抗体的磁珠与样品一起孵育以进行捕获,然后进行洗涤和洗脱。
如果靶蛋白丰度不高,可以使用间接方法,即将第一抗体首先与细胞裂解物一起孵育以形成抗体 - 抗原复合物。然后将 Dynabeads 磁珠加入样品中,进行洗涤和洗脱,以捕获复合物。
虽然可以手动执行 IP,但洗涤步骤的数量和手动操作时间会随着样本数量的增加而增加。使用 KingFisher 仪器自动化流程可以消除移液和其他手动处理引入的不一致问题。自动化方案复制手动方案,从而获得同样高的靶蛋白产率以及相同的低非特异性结合和高重复性。无论您需要处理 10 个还是 96 个样本,IP 方案所需的时间均不到 40 分钟。只需将试剂加载到孔板上,按下 Start(开始)按钮,到您准备好下游分析时,IP 即可完成。根据抗体和靶蛋白的丰度和/或特异性,可能需要进行一些优化(例如,孵育时间)。
试剂盒的选择取决于需要分离的靶蛋白。如果有蛋白质的第一抗体,建议使用 Dynabeads 蛋白 A 或 G 磁珠或其相关试剂盒。如果您有第二抗体,建议使用一种 Dynabeads M-280 IgG 磁珠产品。最后,如果您有生物素化抗体或配体,建议使用 Dynabeads M-280 链霉亲和素磁珠。
肽图分析是生物医药蛋白表征中的一个关键工作流程,对解析蛋白质的初级氨基酸结构至关重要。 要生成肽图,必须先通过化学反应或酶反应将治疗性蛋白酶解成肽段。但是目前酶解和测序的方法涉及冗长且步骤繁多的手动过程,这些过程的缺点是其重复性、灵敏度和数据可信度较低。
Thermo Scientific SMART Digest 磁试剂盒与 KingFisher 仪器配套使用,可以将 24 小时的处理时间缩短至 1 小时或更短,自动化大部分手动操作,消除了变化因素和手动误差的根源。
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SMART Digest 胰蛋白酶、糜蛋白酶和蛋白酶-K 试剂盒(肽图分析) |
SMART Digest 免疫亲和 (IA) 链霉亲和素试剂盒(多肽定量) |
货号 |
胰蛋白酶试剂盒:60109-101–60109-103 糜蛋白酶试剂盒:60109-104–60109-106 蛋白酶 K 试剂盒:60109-107–60109-109 |
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补充信息 |
与 KingFisher 仪器配套使用的 Thermo Scientific SMART Digest 试剂盒是自动化蛋白酶解用于肽图分析和定量应用的最新进展。该试剂盒使蛋白质酶解快速、简单、可重复,且易于实现自动化。
蛋白质消化试剂盒使用了经过优化的磁珠上的耐热酶,可最大限度降低翻译后修饰的可能性。自动化过程最大程度地减少了手动操作,确保了最佳的反应时间,并减少了高温暴露,从而提高了 结果的重复性。[1]
免疫亲和 (IA) 试剂盒可在单个磁珠上完成酶消化与 IA 捕获,以实现高灵敏度。这一创新技术为您的高效液相色谱 (HPLC) 和液相色谱/质谱 (LC/MS) 结果带来了高度的信心。SMART Digest 试剂盒特别适合生物标记物、生物制药表征和定量应用。
对于肽图分析应用,可选择优化的耐热胰蛋白酶、糜蛋白酶或蛋白酶 K 酶消化,以实现蛋白质的序列特异性剪切。磁珠上的酶在高温下激活,在蛋白质变性条件下可加速消化。
对于肽定量 应用,SMART Digest IA 试剂盒可在单个孔中执行胰蛋白酶消化和免疫亲和捕获。免疫亲和基团(链霉亲和素、蛋白 A 或蛋白 G)通常会通过从复杂生物基质中纯化低水平蛋白来提高灵敏度。
细胞分离过程有三种类型。在阳性细胞分离中,Dynabeads 试剂能与靶细胞结合,磁珠/细胞复合物富集到 KingFisher 磁套尖端。丢弃上清液后,仅保留您的纯靶细胞。
在阴性细胞分离中,Dynabeads Untouched™ 试剂盒用于去除不需要的细胞,在样品中留下无磁珠、未被接触的靶细胞。例如,Dynabeads Untouched 人类 T 细胞试剂盒包含一种抗体混合物,用于去除 B 细胞、自然杀伤 (NK) 细胞、单核细胞、血小板、树突细胞、粒细胞和红细胞,而将所有 T 细胞(仅 T 细胞)留待进一步使用。其他 Dynabeads Untouched 试剂盒能去除 CD4 或 CD8 T 细胞亚群之外的所有T细胞。
如果您对多种细胞类型感兴趣,您可以使用细胞特异性的去除 Dynabeads 试剂并以 >99% 的效率去除非均匀样品中所有不需要的细胞类型。只有目标细胞会留在去除后的上清液中。
分离 T 细胞和亚群通常是在活化和扩增之后。Dynabeads CD3/CD28 技术采用抗原呈递细胞 (APC) 模拟体内 T 细胞活化,并同时实现小鼠和人 T 细胞温和而高效的生理活化和扩增。
要从细胞培养物中分离并富集总外泌体,请使用总外泌体分离试剂。然后可以使用 Dynabeads CD9、CD63、CD81 或 EpCam 特异性试剂将其进一步纯化成特定的亚群。或者,将 Dynabeads 链霉亲和素试剂与生物素化抗体的选择相结合,以纯化任何基于表面抗原的群体。
下游应用决定用于外泌体捕获的磁珠数量。对于流式细胞术,磁珠保留数量较少,以确保每个磁珠的外泌体密度较高,并获得较强的信号。对于免疫印迹法,使用大量的磁珠来最大程度提高总表面积并提供较强的信号。这会使上清液中外泌体非常少。