Platinum Genotype Tsp DNA Polymerase

Invitrogen Platinum GenoType Tsp DNA 聚合酶是一种来自嗜热细菌的重组DNA 聚合酶。它是一种经基因工程改造的耐热聚合酶 (Tsp)，用于二核苷酸重复位点的基因分型。该酶与一种专有抗体结合，可在室温下抑制聚合酶活性。

产品优势

  • 提高等位基因大小测定的准确度—非模板化核苷酸添加活性（也称为延伸酶活性）最小化；缺乏 5′ 和 3′ 核酸外切酶活性
  • 方便的实验流程—可在 PCR 中取代 Taq DNA 聚合酶，支持室温下配制反应体系
  • 增强的特异性—与抗 Tsp 抗体搭配用于热启动 PCR

本页内容

用于二核苷酸重复位点基因分型的 Tsp DNA 聚合酶

由于 Taq DNA 聚合酶通常会向 PCR 产物添加非模板化核苷酸（例如一个或多个腺苷），所以检测扩增的二核苷酸重复区域的大小可能有一定难度。含多余核苷酸的PCR扩增子序列具有异质性，取决于反向引物的序列。

在向 PCR 产物添加非模板化多余核苷酸时，Platinum Genotype Tsp DNA 聚合酶表现为活性下降。借助这种酶学性质，研究人员就能在进行二核苷酸重复位点基因分型时，利用 PCR准确测定等位基因的大小。

DNA 聚合酶用于二核苷酸重复标记基因分型的比较
图 1.DNA 聚合酶用于二核苷酸重复标记基因分型的比较。使用 Taq DNA 聚合酶 (66% n + 1) 或 Platinum GenoType Tsp DNA 聚合酶 (0% n + 1) 扩增拟南芥 nga106 基因座。

经 5´-GTGTCTT 末端修饰的反向引物（也称为 PIG-末端引物）通常与 Taq DNA 聚合酶配合用于增强多余核苷酸的添加，并促进allele calling [1]。这些经过修饰的反向引物与 Platinum GenoType Tsp DNA 聚合酶配合使用时，多余核苷酸的添加量增加，但所测位点的allele calling不受影响。因此，Platinum GenoType Tsp DNA 聚合酶对用于二核苷酸重复微卫星 PCR 基因分型的标准或修饰反向引物都有效。

 常规primer sets修饰primer sets
Tsp DNA 聚合酶Taq DNA 聚合酶Tsp DNA 聚合酶Taq DNA 聚合酶
经验证的primer sets81621919
n pattern的扩增子
（无多余核苷酸）		97%2%58%0%
n 和 n+1 pattern的扩增子（混合型）3%50%42%16%
n+1 pattern的扩增子
（有多余核苷酸）		0%48%0%79%

Tsp DNA 聚合酶与 Taq DNA 聚合酶的特点比较

下表比较了 Tsp DNA 聚合酶与 Taq DNA 聚合酶的特点。

特点Tsp DNA 聚合酶Taq DNA 聚合酶
3′ 核酸外切酶否否
5′ 核酸内切酶否是
延伸酶活性减少是
扩增范围0.5 kb5 kb
分子量70 kDa94 kDa
用于基因分型的 5′-GTGTCTT 末端反向引物不需要推荐

Tsp DNA 聚合酶的扩增范围

Tsp DNA 聚合酶不适合扩增大于 500 bp 的 DNA 片段。消除 5′ 核酸外切酶活性和降低延伸酶活性的突变也会减弱酶扩增长模板的能力。

Tsp 抗体性质

Platinum Tsp DNA 聚合酶与抗体预复合，后者在 72°C 左右变性。PCR 第一步中的抗体变性使酶激活，并确保开启自动 热启动 PCR。请注意，Tsp 抗体与用于 Platinum Taq DNA 聚合酶的抗体不同。

订购信息

参考文献

  1. Brownstein MJ, Carpten JD, Smith JR (1996) Modulation of non-templated nucleotide addition by Taq DNA polymerase: primer modifications that facilitate genotyping.Biotechniques 20(6):1004-1006, 1008-1000.

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