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Invitrogen Platinum直接 PCR 通用预混液旨在从各种类型样本中直接扩增DNA靶标,无需纯化 DNA。其为从原始样本中直接扩增靶标 DNA 的理想选择,可用于小鼠基因分型、CRISPR 基因编辑细胞的分析鉴定和珍贵样本的靶标 DNA 检测等实验应用。
该预混液由 Invitrogen Platinum II Taq 热启动 DNA 聚合酶 配制而成,具有高抑制剂耐受性、快速 DNA 合成能力和高灵敏度扩增能力。除DNA聚合酶外,预混液中还包含 dNTP、其它反应组分和用于直接凝胶电泳上样的绿色染料。试剂盒中还单独提供裂解液、蛋白酶 K 和 Invitrogen Platinum GC Enhancer。
查看什么是直接 PCR?它是如何实现的以及如何充分利用 直接 PCR 试剂盒?
Platinum直接 PCR 通用预混液可从各种人源组织中成功扩增靶标 DNA 序列,这些组织包括唾液、口腔拭子、血液(保存于柠檬酸盐、肝素或 EDTA 中)、指甲、头发和 HeLa S3 细胞等。
图2.对各种人源组织直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从各种类型的人源组织中扩增 0.35 kb 和 7.5 kb 片段。采用裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 Invitrogen TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功从各种类型小鼠组织(耳、尾巴、肾脏、心脏、胰腺、肝脏、脾脏、脑、头发、骨髓、骨骼和牙齿)中扩增出靶标 DNA 序列。
图 3.对各种小鼠组织直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从各种类型的小鼠组织中扩增出 0.3 kb 和 3.6 kb 片段。按照裂解方案进行直接PCR。将软组织切成 1 mm 小块,将硬组织(如骨头)在陶瓷研磨机中破碎成 1-2 mm小块。 所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功从各种植物组织中扩增出靶标 DNA 序列,植物组织包括小麦叶、烟草叶、桦木叶、枫叶、木兰叶、兰花叶、拟南芥叶片、玫瑰叶、菩提树叶、丁香叶、草莓叶、淤泥草莓叶、崖柏叶、松树穗、云杉穗、玫瑰果花瓣、草莓、玉米种子、花生、小麦种子、烟草种子、向日葵种子和小麦根。
图 4.对不同植物物种和组织类型直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从列出的植物叶片、种子、根、果实中直接扩增出 0.3 kb 的片段。按照直接方案,使用 1 mm 叶片或压碎的种子进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功从含或不含细胞壁的藻类中成功扩增出靶标DNA 序列。
图 5.对藻类直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum 直接 PCR 通用预混液从含和不含细胞壁的单细胞绿藻Chlamydomonas reinhardtii 中直接扩增出一个0.11 kb 片段。按照裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功地从各种鸟类组织(鸡软骨、鸡肉和鹌鹑羽毛)中成功扩增出靶标 DNA 序列
图 6.对鸟类组织直接进行 DNA 扩增。使用Platinum直接 PCR 通用预混液从所列出的鸡(软骨)和鹌鹑(羽毛)中直接扩增出 0.24 kb 片段。按照裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功从革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中扩增出靶 DNA 序列。
图 7.对细菌直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液直接从革兰氏阴性菌(Escherichia coli )和革兰氏阳性菌(Bacillus subtilis )菌中分别扩增出 0.62 kb 和 0.59 kb 片段。使用裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
图 8.直接 DNA 扩增用于细菌检测。使用Platinum Direct PCR 通用预混液,从水果和蔬菜表面拭子(U =未洗涤,W =洗涤)中直接扩增出细菌16S rRNA序列0.45 kb片段。所示结果遵循裂解方案。分子量标记(M)为Thermo Scientific GeneRuler 1kb DNA Ladder。NTC =无模板对照(无样本拭子)。
Platinum直接PCR 通用预混液成功从斑马鱼多种组织-鳍、鳞片、肌肉和大脑中成功扩增出靶标 DNA 序列。
图 9.对斑马鱼直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从斑马鱼组织中扩增出 0.35 kb 和 1 kb 片段。使用裂解方案进行直接PCR扩增。可以看到,可从斑马鱼的鳍、鳞片、肌肉和大脑组织中成功扩增出目的片段。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功从Drosophila各种组织(全身、半身、头部、半幼虫)中直接扩增出靶标 DNA 序列。
图 10.直接对Drosophila直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从各种Drosophila 各种组织中扩增 0.66 kb 的片段。使用裂解方案进行直接PCR扩增从果蝇身体、头部和幼虫中均成功进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液从保存在柠檬酸、肝素或 EDTA 中的人血中成功直接扩增出靶标 DNA 序列。
图 11.对人血样本直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从保存在柠檬酸、肝素或 EDTA 中的人血中直接扩增出 0.35 kb 和 7.5 kb 的片段。使用裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接PCR 通用预混液从小鼠肾脏 FFPE 样本中成功扩增出靶标 DNA 序列。
图 12.对 FFPE 样本直接进行 DNA 扩增。按照使用说明书,使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从小鼠肾脏 FFPE 样本中成功扩增出不同长度的片段(0.1 kb、0.2 kb、0.3 kb、0.5 kb、1 kb)。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。请注意,FFPE DNA 通常是片段化的,样本质量决定了很难扩增出大于 0.3 kb 的片段。
Platinum直接 PCR 通用预混液可从各种人源组织中成功扩增靶标 DNA 序列,这些组织包括唾液、口腔拭子、血液(保存于柠檬酸盐、肝素或 EDTA 中)、指甲、头发和 HeLa S3 细胞等。
图2.对各种人源组织直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从各种类型的人源组织中扩增 0.35 kb 和 7.5 kb 片段。采用裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 Invitrogen TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功从各种类型小鼠组织(耳、尾巴、肾脏、心脏、胰腺、肝脏、脾脏、脑、头发、骨髓、骨骼和牙齿)中扩增出靶标 DNA 序列。
图 3.对各种小鼠组织直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从各种类型的小鼠组织中扩增出 0.3 kb 和 3.6 kb 片段。按照裂解方案进行直接PCR。将软组织切成 1 mm 小块,将硬组织(如骨头)在陶瓷研磨机中破碎成 1-2 mm小块。 所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功从各种植物组织中扩增出靶标 DNA 序列,植物组织包括小麦叶、烟草叶、桦木叶、枫叶、木兰叶、兰花叶、拟南芥叶片、玫瑰叶、菩提树叶、丁香叶、草莓叶、淤泥草莓叶、崖柏叶、松树穗、云杉穗、玫瑰果花瓣、草莓、玉米种子、花生、小麦种子、烟草种子、向日葵种子和小麦根。
图 4.对不同植物物种和组织类型直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从列出的植物叶片、种子、根、果实中直接扩增出 0.3 kb 的片段。按照直接方案,使用 1 mm 叶片或压碎的种子进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功从含或不含细胞壁的藻类中成功扩增出靶标DNA 序列。
图 5.对藻类直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum 直接 PCR 通用预混液从含和不含细胞壁的单细胞绿藻Chlamydomonas reinhardtii 中直接扩增出一个0.11 kb 片段。按照裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功地从各种鸟类组织(鸡软骨、鸡肉和鹌鹑羽毛)中成功扩增出靶标 DNA 序列
图 6.对鸟类组织直接进行 DNA 扩增。使用Platinum直接 PCR 通用预混液从所列出的鸡(软骨)和鹌鹑(羽毛)中直接扩增出 0.24 kb 片段。按照裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功从革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中扩增出靶 DNA 序列。
图 7.对细菌直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液直接从革兰氏阴性菌(Escherichia coli )和革兰氏阳性菌(Bacillus subtilis )菌中分别扩增出 0.62 kb 和 0.59 kb 片段。使用裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
图 8.直接 DNA 扩增用于细菌检测。使用Platinum Direct PCR 通用预混液,从水果和蔬菜表面拭子(U =未洗涤,W =洗涤)中直接扩增出细菌16S rRNA序列0.45 kb片段。所示结果遵循裂解方案。分子量标记(M)为Thermo Scientific GeneRuler 1kb DNA Ladder。NTC =无模板对照(无样本拭子)。
Platinum直接PCR 通用预混液成功从斑马鱼多种组织-鳍、鳞片、肌肉和大脑中成功扩增出靶标 DNA 序列。
图 9.对斑马鱼直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从斑马鱼组织中扩增出 0.35 kb 和 1 kb 片段。使用裂解方案进行直接PCR扩增。可以看到,可从斑马鱼的鳍、鳞片、肌肉和大脑组织中成功扩增出目的片段。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液成功从Drosophila各种组织(全身、半身、头部、半幼虫)中直接扩增出靶标 DNA 序列。
图 10.直接对Drosophila直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从各种Drosophila 各种组织中扩增 0.66 kb 的片段。使用裂解方案进行直接PCR扩增从果蝇身体、头部和幼虫中均成功进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液从保存在柠檬酸、肝素或 EDTA 中的人血中成功直接扩增出靶标 DNA 序列。
图 11.对人血样本直接进行 DNA 扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从保存在柠檬酸、肝素或 EDTA 中的人血中直接扩增出 0.35 kb 和 7.5 kb 的片段。使用裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接PCR 通用预混液从小鼠肾脏 FFPE 样本中成功扩增出靶标 DNA 序列。
图 12.对 FFPE 样本直接进行 DNA 扩增。按照使用说明书,使用 Platinum直接 PCR 通用预混液从小鼠肾脏 FFPE 样本中成功扩增出不同长度的片段(0.1 kb、0.2 kb、0.3 kb、0.5 kb、1 kb)。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。请注意,FFPE DNA 通常是片段化的,样本质量决定了很难扩增出大于 0.3 kb 的片段。
Platinum直接 PCR 预混液的缓冲液含独特配方,有助于减少 PCR 扩增中繁琐的优化步骤。创新的缓冲液使得引物能够在 60°C(通用退火温度)下退火,无论引物序列如何(按照常规引物设计规则)(图 13)。当在退火步骤中使用自己计算出的Tm 时,也可进行成功扩增(数据未显示)。
图 13.当使用Platinum直接 PCR 通用预混液在 60°C 通用退火温度下扩增各种类型样本时,均可获得高特异性和高产率的 PCR 产物。使用退火温度不同的引物对(如上所示)从植物、小鼠和人的不同组织中扩增5个靶标。同时使用直接方案和裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
了解退火步骤在 PCR 扩增中的重要性,如何利用独特PCR 缓冲液减少反应优化,以及通用退火温度的优势。
借助创新型缓冲液,Platinum直接 PCR 通用预混液可实现使用通用退火温度、灵活的延伸时间,从而使得不同PCR反应可以同时进行扩增。
图 14.通用 PCR 方案可节省时间并实现不同PCR反应同时扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液,对于不同的PCR反应,均可使用一种方案(通用的引物退火温度和基于最长片段计算的延长时间),从而实现不同 PCR同时进行扩增(图 15)。
图 15.Platinum直接 PCR 通用预混液可实现短片段和长片段的同时扩增。从不同物种和组织类型的样本中同时扩增出 0.2 kb、0.6 kb、1 kb、1.5 kb 和 2 kb 的片段,均使用同一种扩增方案:94℃ 变性 15 秒,60℃ 退火 15 秒,68℃ 延伸 40 秒。延伸时间按最长靶标进行计算。
样本大小和样本量对于直接PCR 的成功扩增至关重要。样本量太少会由于模板起始量不足而导致 PCR 扩增失败。另一方面,样本量太多会引入太多可抑制 PCR 扩增的细胞组分和碎片。Platinum直接 PCR 通用预混液使用手册中提供了建议的样本量。
图 17.直接方案和裂解方案的建议样本大小(未提供实际大小)。通常,使用0.5–1.0 mm 的固体样本用于直接方案。尽管裂解方案可使用多达 10 mm 的样本,但建议裂解方案使用 0.5–2.0 mm 大小的样本。有关不同样本类型的详细建议,请参阅产品手册。
Platinum直接 PCR 通用预混液为绿色预混液,可用于 PCR 产物的直接凝胶上样,省去了向PCR产物中添加染料的繁琐步骤,同时有助于减少移液误差,缩短动手操作时间。
图 18.绿色预混液可实现 PCR 产物直接上样至凝胶进行电泳检测。Platinum直接 PCR 通用预混液包含一种密度试剂和两种示踪染料。使用两种染料(蓝色和黄色)可轻松跟踪 DNA 的迁移,这两种染料在电泳过程中易于查看(泳道分别如右图中 5 分钟和 15 分钟所示)。
Platinum直接 PCR 通用预混液使用 Platinum II Taq 热启动 DNA 聚合酶设计而成,该酶是一种可快速进行 DNA 合成的基因工程酶。因此,与其它直接 PCR 试剂盒相比,Platinum 直接 PCR 预混液可以更快地获得 PCR 结果(图 19)。
图 19.快速扩增,缩短 PCR 运行时间。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液和其它供应商的直接 PCR 试剂盒对 1 kb 的片段进行35 个循环的扩增。每种试剂盒的循环次数以紫色显示,Applied Biosystems ProFlex PCR 系统的升温时间(6°C /秒的升温速率)以红色显示。
Platinum直接 PCR 通用预混液的直接方案和裂解方案所扩增片段的大小范围。
图 20.Platinum Direct PCR 通用预混液的直接和裂解方案扩增范围。直接方案可扩增长达 2 kb 的片段,而裂解方案可扩增长达 8 kb 的片段。使用肝素保存的人血进行 PCR 扩增。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液使用 Platinum II Taq 热启动 DNA 聚合酶含有 Invitrogen Platinum 热启动技术。这项基于抗体的热启动技术在使用粗样进行直接 DNA 扩增时呈现出卓越的特异性。
图 21.直接 PCR 扩增的高特异性。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液的裂解方案,从鼠耳中扩增 0.3 kb、0.5 kb、1.1 kb、2.2 kb、2.9 kb、3.6 kb 和 5.5 kb 的靶序列。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液使用 Platinum II Taq 热启动 DNA 聚合酶设计而成,该酶是一种高灵敏度的基因工程酶。因此,可以使用 Platinum直接 PCR 预混液检测低样本起始量的靶序列。
图 22.对低起始量样本的高灵敏PCR扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液的裂解方案,从 5–500个 HeLa S3 细胞中扩增 0.4 kb 和 2.2 kb 靶序列。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum直接 PCR 通用预混液可从 高AT含量和高GC含量模板中进行高效扩增。产品随附提供一管单独的 Platinum GC Enhancer,用于对高 GC 含量的靶标进行扩增,提高扩增特异性和产量。
图 23.对 高AT含量和高GC含量靶标的强劲直接扩增。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液的裂解方案,从人口腔拭子中扩增 14 种不同 GC 含量的靶标。Platinum GC Enhancer(包含在试剂盒中)用于 GC 含量超过 65% 靶标的扩增。所用分子量标准为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
Platinum Direct PCR 通用预混液可在一个反应中扩增多个靶标。
图 24.在直接 PCR 中进行多达5个靶标的高效多重扩增。使用单重和5重PCR扩增,从小鼠耳朵、尾巴和头发中扩增不同长度(0.1 kb-1.1 kb)的片段。使用 Platinum直接 PCR 通用预混液裂解方案进行直接PCR扩增。所用分子量标准(M)为 Invitrogen TrackIt 100 bp DNA Ladder。
Platinum Direct PCR 通用预混液在室温下的扩展稳定性可实现高通量分析。该酶的 Platinum 热启动技术可确保室温稳定性和试剂盒的高特异性。
图 25.使用Platinum直接 PCR 通用预混液配制的反应体系在室温下保持稳定。使用 Platinum直接 PCR 预混液的裂解方案,从鼠尾扩增一个 2.2 kb 的片段。反应体系在室温(25°C)或在冰上(4°C)进行配制,然后立即进行 PCR 或在室温(25°C)下放置 8 小时后再进行PCR。可以看到即使在室温下放置 8 小时后,Platinum直接 PCR 预混液仍可获得具有高特异性和高产率的结果。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
使用商业化直接PCR试剂盒对烟叶样本进行直接PCR扩增,比较靶标扩增的产率和特异性。
图 26.对烟叶可直接进行强劲的 DNA 扩增。使用直接方案,Platinum直接 PCR 通用预混液(最左边泳道)可高特异性、高产量地从烟叶中直接扩增一系列不同大小的DNA片段(0.15 kb、0.6 kb、0.75 kb、1.6 kb 和 2.2 kb)。同时使用市售同类直接PCR 试剂盒扩增相同的靶标。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
使用商业直接 PCR 试剂盒扩增烟草种子,比较靶标扩增的产率和特异性。
图 27.直接对烟草种子进行强劲的 DNA 扩增。使用裂解方案,Platinum直接 PCR 通用预混液(最左边泳道)可高特异性、高产量地从烟草种子中直接扩增一系列不同大小地DNA片段(0.15 kb、0.6 kb、1.6 kb 和 2.2 kb)。同时使用市售同类其它直接PCR 试剂盒扩增相同的靶标。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
使用商业直接 PCR 试剂盒直接扩增鼠耳样本,比较靶标扩增的产量和特异性。
图 28.直接对鼠耳进行强劲的 DNA 扩增。使用裂解方案,Platinum Direct PCR 通用预混液(最左边泳道)可高特异性、高产量的从鼠耳中直接扩增一系列不同大小的DNA片段(0.3 kb、0.5 kb、1.1 kb、2.2 kb、2.9 kb、3.6 kb 和 5.5 kb)。同时使用其它同类直接 PCR 试剂盒扩增相同的靶标。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
使用商业直接PCR试剂盒对人类唾液样本进行直接PCR扩增,比较靶标扩增的产量和特异性。
图 29.直接对人类唾液进行强劲的 DNA 扩增。使用裂解方案,Platinum直接 PCR 通用预混液(最左边泳道)可高特异性、高产量的从人类唾液中直接扩增一系列不同大小的DNA片段(0.2 kb、0.8 kb、2 kb、4.5 kb 和 7.5 kb)。同时使用同类直接PCR 试剂盒扩增相同的靶标。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
使用商业直接PCR试剂盒对人类血液样本进行直接PCR扩增,比较靶标扩增的产量和特异性。
图 30.直接对人类血液进行强劲的 DNA 扩增。使用直接方案或裂解方案,Platinum直接 PCR 通用预混液(左边泳道)可高特异性、高产量的从人类血液中直接扩增一系列大小不同的DNA片段(0.2 kb、0.35 kb、0.8 kb、2 kb、3.3 kb、4.5 kb 和 7.5 kb)。同时使用同类直接PCR 试剂盒扩增相同的靶标。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
使用商业直接PCR试剂盒对人类细胞系进行直接PCR扩增,比较靶标扩增的产量和特异性。
图 31.直接对人类细胞进行强劲的 DNA 扩增。使用直接方案或裂解方案,Platinum直接 PCR 通用预混液(最左边泳道)可高特异性、高产量的从HeLa S3 细胞中直接扩增一系列大小不同的DNA片段(0.2 kb、0.8 kb、2 kb、4.5 kb 和 7.5 kb)。同时使用市售其它直接PCR 试剂盒扩增相同的靶标。所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。
使用商业直接PCR试剂盒对小鼠肾脏 FFPE 样本进行直接PCR扩增,比较靶标扩增的产量和特异性。
图 32.直接对 FFPE 样本进行强劲的 DNA 扩增。使用裂解方案,Platinum直接 PCR 通用预混液(左边泳道)可高特异性、高产量的从小鼠肾脏 FFPE 切片中直接扩增一系列不同大小的DNA片段(0.1 kb、0.2 kb、0.3 kb、0.5 kb 和 1 kb)。同时使用2.7市售其他直接PCR试剂盒扩增了相同的靶标。NTC 代表无模板对照,所用分子量标准(M)为 TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。请注意,FFPE DNA 通常是片段化的,样本质量决定了难以扩增大于 0.3 kb 的片段。
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