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从液氮中解冻后,将 SW480 细胞维持培养在 Nunclon Delta T25 细胞培养瓶内添加了 10% Gibco FBS 和 1% Pen-Strep 的 Gibco DMEM 培养基中,经2次传代后接种用于生成球状体。然后遵循 ATCC 实验方案进行传代培养。
要接种的 细胞数量 | I 型胶原蛋白用量 每毫升 (ml) 培养基 |
---|---|
10,000个细胞 | 30 µg |
5,000个细胞 | 15 µg |
2,500个细胞 | 8 µg |
1,250个细胞 | 4 µg |
625个细胞 | 2 µg |
312个细胞 | 1 µg |
图注:不同密度(625-10,000 个细胞)条件下在 Nunclon Sphera 微孔板中生成的 SW480 球状体。在第2天和第7天使用 EVOS 7000 显微镜捕获图像。不存在 ECM 的比例图只代表出现了细胞团块而不是球状体,而使用 I 型胶原蛋白时球状体则均匀且完整。比例尺等于 650 µm。
每种细胞密度往往会生成不同的球状体尺寸;因此在继续高通量实验之前,必须评估球状体的密度。下面的图表显示了在 SW480 细胞系中获得的不同球状体尺寸与其相应细胞密度。适用于 HT 检测的球状体尺寸直径约为 300-500 μm。
球度是另一种确定球状体圆度或圆形性质的现象。较大的球度可确保球状体保持完整、圆形且难以分解。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。