材料

  • 柠檬酸三钠
  • 柠檬酸
  • NaCl
  • 加湿培养箱（5% CO2 ± 1%，36°C ± 2°C）

实验方案

在 AlgiMatrix 微孔板上生成球状体

以 20,000 - 80,000 个细胞/孔的密度按将一式三份将细胞铺于 AlgiMatrix 微孔板上的 100 ml 完全培养基中。以 100 x g 的设置对微孔板离心4分钟。 在 37°C 的 5% CO2 培养箱中孵育微孔板10分钟。随后向每孔中添加 130 ml 完全培养基。

通过柠檬酸三钠方法原位收获球状体

  1. 吸出孔中的培养基
  2. 使用 1 g/L 葡萄糖制备 55 mM 等渗柠檬酸三钠溶液，并将溶液加热至 37°C
  3. 向每孔中加入 250 μL 预热的柠檬酸三钠溶液，并在 37°C 下孵育10分钟
  4. 在 25°C 下以 200 x g 的设置对微孔板离心4分钟
  5. 用机械移液器和切割式吸头从孔中吸出柠檬酸三钠溶液
  6. 重复步骤3、4和5
  7. 收集并处理球状体用于下游应用（DNA、RNA、免疫荧光和蛋白提取）


制备等渗柠檬酸三钠溶液/葡萄糖溶液

  1. 通过稀释 1M 储备液得到 55 mM 柠檬酸三钠溶液，并向其中添加 1 g/L 葡萄糖
  2. 用 100 g/L NaCl 溶液调节渗透压（培养基的渗透压）
  3. 用 1M 柠檬酸溶液将 pH 值调节至 pH 7.2 - 7.4


备注： 向溶液中添加 1 g/L NaCl 可将渗透压升高 30 mOsm

LT119

仅供科研使用，不可用于诊断目的。