在 Geltrex 低生长因子基底膜基质中培养细胞

基底膜是细胞外基质特化形成的连续膜层，可以在内皮细胞、上皮细胞、肌肉或神经元细胞与其相邻基质之间形成界面。基底膜在发育和伤口修复过程中会发生降解和再生。基底膜不仅为细胞和细胞层提供支持，而且在影响细胞粘附、迁移、增殖和分化的组织结构中也发挥着重要作用。

基底膜是转移性肿瘤细胞侵袭的主要障碍。基底膜基质是从 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 肿瘤纯化而来的可溶性基底膜。提取物在 37°C 下胶凝从而形成重组基底膜。基底膜基质的主要组分包括层粘连蛋白、IV 型胶原蛋白、巢蛋白和硫酸肝素蛋白聚糖。基底膜基质可用于促进和维持包括原代上皮细胞、内皮细胞和平滑肌细胞在内的多种细胞培养物中的分化表型。其已用于血管生成检测、神经突增生检测以及肿瘤细胞侵袭检测。

在 2-8°C 下过夜解冻 Geltrex™ 基底膜基质。冷藏冰箱温度可能不同；因此应在冷藏冰箱内的冰上解冻提取物。温度达到 15°C 以上时，基底膜基质会在 5-10 分钟内形成凝胶；因此，操作装满样本的 5 ml 小瓶时，如果在5分钟内使用，且环境温度不超过 25°C，则不需要将其放在冰上。此外也不需要预冷移液器吸头、试管、孔板或其他可能接触提取物的物品。由于较小体积加热速度更快，部分试管和等份样本应保留在冰上，以防止过早形成胶凝。
 
当使用 <5 ml 体积的 Geltrex 时，请将其等分为适当的工作体积并储存于 -20 至 -80°C 下。
 
避免多次冻融循环。

基底膜基质的很多应用需要不同的厚度和浓度。通常情况下，原代细胞的分化研究采用 > 9 mg/ml 的蛋白浓度。稀释至 9 mg/ml 以下的提取物不会形成凝胶，并且仅支持原代细胞的增殖，不支持其分化。对于内皮细胞分化为毛细管状结构（血管实验）等应用，则需要薄凝胶。对于大鼠主动脉组织分化为毛细管状结构（动脉环实验）或细胞浸润实验等应用，则需要厚凝胶。一些应用（如原代细胞增殖）仅需要蛋白质层而不需要蛋白质基质；因此，应使用分层法。


薄凝胶法：

1. 解冻 Geltrex。请参阅注意事项。
2. 通过缓慢上下移液混匀 Geltrex；注意不要引入气泡。
3. 以 50 µl/cm₂ 置于生长表面上。
4. 将包被对象在 37°C 下放置30分钟
5. 包被对象可即时使用。

厚凝胶法：

1. 解冻 Geltrex。请参阅注意事项。
2. 通过缓慢上下移液混匀 Geltrex；注意不要引入气泡。
3. 以 150-200 µl/cm₂ 置于生长表面上。
4. 将包被对象在 37°C 下放置30分钟。
5. 包被对象可即时使用

薄层法（非胶凝）：

1. 解冻 Geltrex。请参阅注意事项。
2. 通过缓慢上下移液混匀 Geltrex；注意不要引入气泡。
3. 用低温无血清培养基将提取物稀释至所需浓度。可能需要根据经验测定适合您的应用的最佳包被浓度。对于原代细胞增殖，建议采用的起始蛋白浓度为 0.1 mg/ml。
4. 添加足量溶液，以覆盖生长表面上的整个区域。
5. 将包被对象在 37°C 下放置60分钟或直至干燥。
6. 包被对象可即时使用。

适合 hESC 应用的薄凝胶法（非胶凝）：

1. 解冻 Geltrex。请参阅注意事项。
2. 通过缓慢上下移液混匀 Geltrex；注意不要引入气泡。
3. 将 1 ml Geltrex 稀释到 29 ml DMEM/F12 培养基中（SKU：10565）。可能需要根据经验测定适合您的应用的最佳包被浓度。可相应调整体积。
4. 添加足量的稀释后 Geltrex 溶液，以覆盖到生长表面上的整个区域（35 mm 培养皿使用 1.5 ml 溶液，60 mm 培养皿使用 3 ml 溶液）。
5. 包被培养皿，并在室温下放置至少60分钟。
6. 若要长期储存，使用石蜡封口膜密封每个培养皿，以尽量减少 Geltrex 溶液脱水。包被后的培养皿可在 2-8°C 条件下稳定保存两周。请勿让包被表面变干，且应维持 2-8°C 的储存温度，以避免过早胶凝。
7. 使用时，吸出 Geltrex™ 包被液，并立即将细胞铺于预平衡的细胞培养基中。

特点和来源

• 提供可用于培养大量细胞类型（包括干细胞和原代细胞）的 3D 基质
• 减少特异性生长因子
• 在含 10 µg/ml 硫酸庆大霉素且不含酚红的杜氏改良 Eagle 培养基中配制而成

来源

鼠 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 肿瘤