Qubit Protein Assay

迅速かつ正確なタンパク質定量

Qubit Protein Assay Kitは、正確な定量を実現しながら、タンパク質の定量を容易にするように設計されています。Qubitタンパク質アッセイに必要な室温インキュベーション時間はわずか10～15分であり、長時間のインキュベーションや高温への曝露が不要です。

2つのキットは、重複する濃度範囲に対応し、12.5 μg/mL～20 mg/mLの初期サンプル濃度に対して正確で、タンパク質間のばらつきが小さいことが特徴です。還元試薬（DTT、βメルカプトエタノール）、塩類、遊離ヌクレオチド、アミノ酸などの一般的な汚染物質、溶媒、DNA、および界面活性剤（Qubit Protein BRアッセイ）は、アッセイにおいて十分に許容されます。他の汚染物質は、手順を若干変更する必要があることもあります。

Note：Qubit Protein AssayはQubit 4 FluorometerおよびFlex Fluorometerの両方で使用できますが、Qubitタンパク質BRアッセイはQubit 4モデルでのみ使用できます。

タンパク質定量アッセイの概要

特長	Qubit Protein BR Assay	Qubit Protein Assay
幅広い濃度・種類のタンパク質に	適応	試験希釈サンプル、<100 μg/mL
互換性のあるプラットフォーム	Qubit 4 Fluorometer	Qubit Flex、Qubit 4 Fluorometer※
特長	2点標準曲線によるシンプルで迅速なアッセイ	3点標準曲線によるシンプルで迅速なアッセイ
必要なサンプル量	10または20 μL	1～20 μL
適合性	界面活性剤還元剤（例：TCEP、DTT）	還元剤（例：TCEP、DTT）
互換性なし	グリシン	界面活性剤（SDS、Tween 20、Triton X-100など）
初期サンプル範囲	100 μg/mL～20 mg/mL	12.5 μg/mL～5 mg/mL
測定範囲	1～400 µg	0.25～5 µg
カタログ番号	A50668（100アッセイ） A50669（500アッセイ）	Q33211（100アッセイ） Q33212（500アッセイ）

※Qubit Protein Assayは、Qubit 2およびQubit 3の旧モデルにも対応しています。

広いダイナミックレンジ

Bradfordアッセイなどの標準的なアッセイと比較して、Qubit Proteinアッセイの幅広いダイナミックレンジにより、ほとんどのサンプルをそのまま（原液のまま）使用することが可能になります。これにより、従来のタンパク質定量法に伴う当て推量や希釈のステップがなくなります。

Qubit Proteinアッセイは、Bradfordアッセイなどの標準的なタンパク質定量アッセイよりもはるかに広いダイナミックレンジを提供します。Qubit Proteinアッセイは、12.5 μg/mLまでのタンパク質を正確に定量でき、Qubit Protein BRアッセイ（Qubit 4 Fluorometerに対応）は最大20,000 μg/mLまでの定量範囲を有します。

シンプルで迅速な定量

Qubitタンパク質アッセイは、タンパク質定量に通常5～7点の標準曲線が必要な従来のアッセイとは異なり、わずか2～3種類の標準物質を準備するだけで簡単に実施、設定することができます。

Qubit Protein BR Assayのワークフロー

Qubit Protein Assayのワークフロー

正確なタンパク質定量

タンパク質は、その組成や構造が多様です。アミノ酸配列、等電点（pI）、二次構造、および側鎖またはプロテーゼ基の違いにより、定量された量にばらつきが生じることがあります。Qubit Protein BR Assayは、Bradfordアッセイなどの従来のアッセイと比較して、タンパク質間のばらつきが少ない、正確なタンパク質定量を実現します。

タンパク質の発現を研究するためにウェスタンブロット解析用の電気泳動ゲルをロードする場合は、正確なタンパク質ローディングが不可欠です。この実験では、Qubit Protein BR Assayおよび従来のBradford Protein Assayを使用して、5種類の細胞ライセートについて10 μgのタンパク質ロード量を測定しました。No-Stain Protein Label Reagentを使用して、iBright FL 1500 Imaging Systemで総タンパク質レーンロード量を推定しました。Qubit Protein BR Assayでは、ライセートのタンパク質濃度を正確に測定し、ロード間の変動係数（CV）は11%であったのに対し、Bradfordアッセイでは28%と高い変動係数を示しました。

複雑なタンパク質混合物からタンパク質ロード量を正確に決定

Qubit Protein BR Assayおよび標準のBradfordアッセイを使用して、複数の哺乳類細胞タイプからのライセートのタンパク質濃度を測定しました：293T、A549、HepG2、HeLa、およびiPSC。ライセートはInvitrogen NuPAGE 4～12% Bis-Tris Mini Protein Gelで分離し、No-Stain Protein Labeling Reagentで標識しました。（A）ゲル画像はiBright FL1500 Imaging Systemで取得し、（B）正規化係数はInvitrogen iBright Analysis Softwareを使用して決定しました。Qubit Protein BR AssayのCVはBradfordアッセイよりも明らかに低い値でした。

バッファー互換性表

Qubitタンパク質アッセイと一般的なバッファー成分との互換性

汚染物質	Qubit Protein BR Assay	Qubit Protein Assay
汚染物質	サンプルの適合濃度
β-メルカプトエタノール	1 mM	10 mM
アセトニトリル	20%
硫酸アンモニウム	200 mM	50 mM※
Bicine	100 mM
ホウ酸塩（50 mM、pH 8.5）	希釈なし
B-PER試薬	希釈なし
CHAPS	5%
炭酸-重炭酸	希釈なし
DTT	5 mM	10 mM※
DMSO	10%
EDTA	50 mM	10 mM
グルコース	1 M
グリセロール	10%	10%※
グアニジン塩酸塩	4 M
イミダゾール	200 mM	12.5 mM
I-PER	希釈なし
Mem-PER	希釈なし
MES	125 mM
MOPS	100 mM
M-PER	希釈なし
酢酸ナトリウム	100 mM
アジ化ナトリウム		10 mM
塩化ナトリウム	5 M	200 mM※
NE-PER（CER）	希釈なし
NE-PER（NER）	希釈なし
NP-40	5%	Ø
リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、pH 7.4	希釈なし	10 mM KPO₄、150 mM NaCl※
リン酸カリウム、pH 7.4		5 mM
PMSF	1 mM
RIPA	希釈なし
SDS	5%	0.1%※
スクロース	20%	500 mM
T-PER	希釈なし
トリシン	50 mM
トリス緩衝生理食塩水（TBS）	希釈なし
トリスグリシン、pH 8.0	Ø
トリスグリシンSDS、pH 8.3	Ø
Tris-HCl	500 mM
Tris-HEPES SDS、pH 8.0	希釈なし
Triton X-100	5%	Ø
Tween 20	3%	Ø
尿素	3 M
Y-Per	Ø
GPCR抽出および安定化試薬	1：2
細胞表面タンパク質単離キット	希釈なし

※許容範囲内の結果だが、標準曲線に若干の歪みがあります。最良の結果を得るには、標準サンプルに同じ量のコンタミナントを添加します。

方法Qubit Protein BR AssayおよびQubit Protein Assayは、一般的に使用されるバッファーと汚染物質を含む1,000 μg/mLのBSAサンプルを用いて、説明書に従って実施しました。アッセイは3回ずつ実施し、RFU値をBSAの値と比較しました（0.9% NaCl、0.05% NaN₃）。被験物質の存在によるタンパク質濃度の推定誤差が10%未満であれば、表示濃度での被験物質の適合性があると判断されました。表中の濃度はタンパク質サンプル中における実濃度を示しています。Øは、試験された最低濃度では適合しなかった化合物を示します。空欄は、そのアッセイで化合物が試験されていないことを示します。

適合性試験で使用されるバッファーの処方

緩衝液	組成
炭酸-重炭酸バッファー、pH 9.4	炭酸-重炭酸バッファー、pH 9.4
リン酸緩衝生理食塩水（PBS）	100 mMリン酸ナトリウム、150 mM塩化ナトリウム、pH 7.2
RIPAバッファー	25 mMトリス、150 mM塩化ナトリウム、1% DOC、1% NP-40、0.1% SDS、pH 7.6
トリス緩衝生理食塩水（TBS）	25 mMトリス、150 mM塩化ナトリウム、pH 7.4
トリスグリシン、pH 8.0	25 mMトリス、192 mMグリシン、pH 8.0
トリスグリシン-SDS、pH 8.3	25 mMトリス、192 mMグリシン、0.1%SDS、pH 8.3
Tris-HEPES-SDS	100 mMトリス、100 mM HEPES、3 mM SDS