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Invitrogen Qubitアッセイでは、DNA、RNA、タンパク質のターゲットに結合したときのみ蛍光を発するターゲット特異的色素を使用しています。塩類、溶媒、界面活性剤、タンパク質、遊離ヌクレオチドなどの汚染物質によりサンプル濃度を過大評価する可能性のある従来のUV吸光法と比較して、より正確な測定が可能です。また、蛍光測定はUV吸光よりもはるかに感度が高く、Qubit Fluorometerは、低ノイズで希釈サンプルを正確に測定できます。
ヒント:ハイスループットな定量を行うには、蛍光機能を備えたマイクロプレートリーダーの使用をご検討ください。Thermo Scientific Varioskan ALFおよびVarioskan LUXマルチモードマイクロプレートリーダーはQuant-iTアッセイと互換性があり、Qubit Fluorometerやアッセイと同じ分析物を定量できます。比較するには、RNA/DNA定量化のページをご覧ください。
Qubitアッセイは測定対象の分析種によって異なりますが、高い選択性と感度、Qubit 4またはFlex Fluorometerとの併用が容易であるなどの特長があります。
色素は、DNA、RNA、またはタンパク質に特異的に結合
UV吸光度や従来のBradfordタンパク質アッセイよりも高感度
色素は、ターゲットに結合したときのみ蛍光を発します
分解したDNAやRNAなどの汚染物質の影響を最小限に抑えることができます。
簡単な操作で実行可能
シンプルなミックス&リードフォーマット
短いインキュベーション時間
DNAおよびRNAアッセイではわずか2分、タンパク質アッセイでは10~15分です。
Qubit Fluorometer用にデザイン
Qubit 4およびQubit Flex Fluorometer用に最適化されています
Qubitアッセイは、二本鎖および一本鎖DNA(dsDNAおよびssDNA)、RNA、microRNA、およびタンパク質に対応しています。Qubit DNAアッセイおよびRNAアッセイは、さまざまな定量範囲でご利用になれます。HS(高感度)アッセイは、最低濃度の分析物の定量、BR(広範囲)アッセイはより広い範囲での定量、RNA XR(拡張範囲)アッセイは豊富なサンプルに最適です。これらの多様な検出範囲により、幅広い濃度にわたって正確な測定が可能になります。グラフが示すように、Qubit HSアッセイおよびQubit BRアッセイはUV吸光法よりも低濃度の分析物を検出できることがわかります。
QubitアッセイおよびUV吸光のサンプル濃度範囲
Qubitシステムを用いた蛍光ベースの定量は非常に高感度で、少量のサンプルで定量でき、サンプルにDNAとRNAの両方が含まれている場合でも、目的のターゲットのみを測定することができます。標準的なUV吸光度測定値は、低濃度の分析物を検出するのに十分な感度がなく、RNAとDNAを区別せずにサンプル中のすべての核酸を定量します。
さらに、Qubitシステムを用いた蛍光ベースの定量では、通常UV吸光度測定では不可能な同一サンプル内のRNAとDNAの区別が可能です。Qubitプラットフォームが提供するトータルソリューションにより、アッセイ、消耗品、および装置が卓越した性能を発揮できるように相互に最適化されているため、信頼性の高い結果が得られます。
Qubit dsDNAアッセイには、2種類の定量範囲(HSおよびBR)と2種類のフォーマット(standardおよび1X)があり、いずれも下流でのアプリケーションや処理において重要な考慮事項となっています。また、ssDNAやオリゴヌクレオチドを定量するアッセイも用意されています。
製品 | サンプル濃度 | 測定範囲 | アッセイ数 | 製品番号 |
高感度dsDNAアッセイ | ||||
Qubit 1X dsDNA HS Assay Kit | 0.005~120 ng/μL | 0.1~120 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit dsDNA HS Assay Kit | 0.005~120 ng/μL | 0.1~120 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit 1X dsDNA HS Assay Lambda Standard | — | — | 500 | |
広範囲dsDNAアッセイ | ||||
Qubit 1X dsDNA BR Assay Kit | 0.2~4,000 ng/μL | 4~4,000 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit dsDNA BR Assay Kit | 0.2~2,000 ng/μL | 4~2,000 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit 1X dsDNA BR Assay Lambda Standard | — | — | 500 | |
ssDNAアッセイ | ||||
Qubit ssDNA Assay Kit | 0.01~240 ng/μL | 0.2~240 ng | 100 |
当社のQubit dsDNA高感度(HS)アッセイおよび広範囲(BR)アッセイは、RNAおよびssDNAよりもdsDNAに対して高い選択性を有しています。高感度アッセイは、低濃度のdsDNAを含むサンプルに対応し、貴重なサンプルの節約に役立ちます。dsDNA HSアッセイおよびBRアッセイでは、塩類、遊離ヌクレオチド、RNA、溶媒、界面活性剤、タンパク質などの一般的な汚染物質に対する許容度が高いです。
Qubit dsDNA HSアッセイの結果
Qubit 4(図)またはQubit Flex Fluorometerでは、結果を数値またはグラフで表示することができます。これらの画像は、低濃度のDNAサンプル用に設計された高感度(HS)dsDNAアッセイを示しています。
この試験では、Qubit dsDNA HSアッセイおよびQubit dsDNA BRアッセイを使用して、Qubit 4およびFlex Fluorometerだけでなく他社の装置でも正確性と精度を評価しました。Qubit 4とFlex装置では、偏差率、CVともに他社製品より低く、高い正確性と精度が実証されました。
Qubit 1X dsDNAアッセイは、便利な混合済みフォーマットで提供されており、Qubit標準溶液の調製ステップを省くことができます。混合済みの溶液にサンプルまたは標準物質を加え、インキュベートするだけで、結果を読み取ることができます。このフォーマットは、キット内のチューブ数(および使用するプラスチックの量)を減らしながら、簡素で迅速なワークフローを実現します。
Qubit 1X dsDNA HSアッセイは、標準的なdsDNA HSアッセイと同じダイナミックレンジと検出限界を提供し、Qubit 1X dsDNA BRアッセイは、拡張レンジで4,000 ng/μLを達成し、標準のdsDNA BRアッセイよりも高いダイナミックレンジを有します。
このQubit 1X dsDNA HS(左)およびBR(右)アッセイのコアレンジでの試験では、同量のRNAが存在する場合でも、dsDNAの測定量が予想値から10%未満しか逸脱していません。
A)Qubit 1X dsDNA HSアッセイ
B)Qubit 1X dsDNA BRアッセイ
Qubit 1X dsDNA HS(A)およびBR(B)アッセイの選択性
プロットは、既知の量のDNAとRNAをシードしたサンプルの定量結果と期待値を示しています。丸は、10 μLのDNAに190 μLの標準溶液を加えた、さまざまな濃度のサンプルを表しています。四角は、10 μLのRNAと10 μLのDNAに180 μLの標準溶液を加えた、さまざまな濃度のサンプルを表しています。丸と四角が近い(場合によってはほとんど区別がつかない)ことから、これら2つのdsDNAアッセイは、RNAの存在による影響をほとんど受けないことがわかります。
Qubit ssDNAアッセイキットは、長いssDNAまたはオリゴヌクレオチドを定量するように設計されています。dsDNAやRNAも検出するため、アッセイを実施する前にssDNAを精製してください。ただし、アッセイ結果は、塩類、短いオリゴヌクレオチド(≤6塩基)、遊離ヌクレオチド、溶媒、界面活性剤、タンパク質などの一般的な汚染物質の影響を受けません。
Qubit RNAアッセイには、異なる濃度範囲の大きなRNAを定量するための3つのアッセイと、小さなRNA分子(microRNA)を定量するための1つのアッセイが用意されています。RNAサンプルの完全性と品質を測定する追加のアッセイについては、次のセクションのRNA IQアッセイを参照してください。
製品 | サンプル濃度 | 測定範囲 | アッセイ数 | 製品番号 |
一般的なRNAアッセイ | ||||
Qubit RNA HS Assay Kit | 0.2~200 ng/μL | 4~200 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit RNA BR Assay Kit | 0.5~1,200 ng/μL | 10~1,200 ng | 100 | |
500 | ||||
Qubit RNA XR Assay Kit | 5~20,000 ng/μL | 100~20,000 ng | 100 | |
500 | ||||
microRNAアッセイ | ||||
Qubit microRNA Assay Kit | 0.025~150 ng/μL | 0.5~150 ng | 100 | |
500 |
RNAの定量には、初期濃度250 pg/μLから10,000 ng/μLまで、3種類のQubit RNAアッセイキットの中から選択することができます。これらのキットは、二本鎖DNA(dsDNA)よりもRNAに対して高い選択性を示します。他のRNAアッセイとは異なり、サンプル中にDNAが存在する場合でも、正確な測定のためにDNaseを必要とすることはありません。これらのアッセイでは、塩類、遊離ヌクレオチド、溶媒、界面活性剤、タンパク質などの一般的な汚染物質に対する許容度が高いです。
この感度試験では、Qubit RNAアッセイとmicroRNAアッセイ(赤色と青色のバー)の両方が、ターゲットRNA(赤色と青色の線)の実際の濃度に非常に近い値で測定されました。
Qubit RNAおよびmicroRNAアッセイの感度
siRNAを2 μg/mL含むサンプルに、x軸に記載した濃度のリボソームRNA(rRNA)を添加しました。その後、この混合物を、Qubit microRNAアッセイ、Qubit RNAアッセイ、およびUV吸光度を使用するNanoDrop A260アッセイで定量しました。8回のリプリケートから得られた結果の平均および標準偏差を示します。NanoDrop装置(紫色のバー)の全RNA濃度の検出限界は1.5 μg/mLで、低濃度での正確性と精度に影響します。Qubit RNAアッセイ(赤色のバー)は、広範なスケールでrRNA濃度を正確に定量することができます。Qubit microRNAアッセイ(青色のバー)は、2 μg/mLのsiRNA濃度を正確に定量しましたが、rRNAがその量の2倍から5倍に増加すると、精度がやや低下しました。青色と赤色のトレンドラインは、それぞれサンプル中のsiRNAとrRNAの実際の濃度を示しています。
Invitrogen Qubit microRNAアッセイキットは、塩類、遊離ヌクレオチド、溶媒、界面活性剤、タンパク質などの一般的な汚染物質が存在する場合でも、microRNAなどのsmall RNA(17~25 ntまたはbp)を簡単かつ正確に定量するためにできるように設計されています。このアッセイは、rRNAまたは大きなメッセンジャーRNA(mRNA)(>1,000 bp)よりも小さなRNAに対して高い選択性を示します。
純粋なサンプル中の小さなRNAは、アッセイチューブ内で0.5 ng程度の低レベルで再現性よく定量することができます。このアッセイは、microRNAやsiRNAを含むすべてのタイプの小さなRNAを、一本鎖および二本鎖の両方で検出することができます。ヌクレオチドを検出しないため、小さなmRNAと完全に分解されたRNAを区別することができます。
Qubit RNA IQアッセイは、RNAサンプルの完全性と品質(IQ)を迅速に評価するために開発されました。1つは大きなRNA、インタクトなRNA、構造化されたRNAに結合し、もう1つは小さなRNA、分解されたRNAに結合する2つの色素を使用します。特別な取り扱いや面倒なサンプル調製、結果を待つ必要がありません。
Qubit Protein Assay Kitは、タンパク質の定量を簡単かつ正確に行えるように設計されています。2つのキットは、重複する濃度範囲に対応し、12.5 μg/mL~20 mg/mLの初期サンプル濃度に対して正確で、タンパク質間のばらつきが小さいことが特徴です。Qubitタンパク質アッセイは、室温で10~15分程度インキュベートするだけで簡単に実施できるため、長時間のインキュベーションや高温にさらされることがありません。
Qubit Endotoxin Detection AssayはQubit Flexフルオロメーター用に設計されており、タンパク質、ペプチド、抗体、核酸など、さまざまな種類のサンプル中のエンドトキシンを定量するための効率的な蛍光エンドポイントアッセイを提供します。広範なサンプル量に対するアッセイが実行可能で、0.01~10.0 EU/mLのダイナミックレンジが確保され、ワークフローもスリム化されます。Qubit Endotoxin Detection Assay Kitの主な機能と特長には次のものがあります。
Invitrogen Qubitシステム検証キットは、Qubit 4 FluorometerおよびQubit Flex Fluorometerの性能をテストする、迅速で使いやすい試薬ベースのアッセイです。ブランク試薬溶液、緑色蛍光試薬、遠赤色蛍光試薬の3つの成分で構成されています。緑色蛍光試薬は、フルオロメーターでの青色励起(470 nm LED;430~495 nm励起フィルター)および緑色蛍光検出(510~580 nm発光フィルター)のテスト用に、遠赤色蛍光試薬は、赤色励起(635 nm LED;600~645 nm励起フィルター)と遠赤色蛍光検出(665~720 nm発光フィルター)のテスト用にデザインされています。
カスタムMyQubitアッセイを使用すると、Qubit Fluorometer用のアッセイを数分で追加作成することができます。Qubitハードウエアとスペクトル的に互換性のある試薬やアッセイは、Invitrogen Qubit Fluorometerで使用できます。また、いくつかの設定済みのMyQubitアッセイをダウンロードすることができます。
MyQubitアッセイは、カスタマイズされた蛍光アッセイをベンチトップで行えるようにし、ラボラトリーの研究や品質管理からプロセスモニタリングまで、多くの定量化ニーズに対応できる信頼性の高いプラットフォームを提供します。USBドライブを使用して簡単に.qbtファイルをダウンロードして転送することにより、Qubit 3.0および4 Fluorometerに新しいアッセイを追加できます。
MyQubitアッセイデザインツール
MyQubitアッセイデザインツールは、カスタムMyQubitアッセイ.qbtファイルを作成し、Qubit 3.0および4 Fluorometerにアップロードする際に役立ちます。
カスタムMyQubitアッセイの例として、Amplex Red試薬を使用して、一般的に定量されるいくつかの分析物に対する新しいMyQubitアッセイを開発しました。アッセイ.qbtファイルをUSBドライブでQubit Fluorometerに転送すると、工場出荷時にロードされているQubitアッセイと一緒に使用でき、Qubit Fluorometerの機能を拡張することができます。
アッセイ | Qubit 3.0およびQubit 4用にダウンロード | Qubit 2.0用にダウンロード※ | PDFマニュアル |
Amplex Red Cholesterol Assay | |||
Amplex Red Galactose Assay | |||
Amplex Glucose Assay | |||
Amplex Red Glutamic Acid Assay | |||
Amplex Red Peroxide Assay | |||
Amplex Red Sucrose Assay |
※Qubit 2.0 Fluorometerでは、MyQubitファイルを転送するために、装置に付属しているような2 GB以下のUSBフラッシュドライブが必要です。
.qbtファイルをダウンロードするには、表中の該当する.qbtファイルのリンクをクリックします。コンピューターに自動的にダウンロードされます。お使いのQubitモデルに適したリンクをクリックしてください。Qubit Fluorometerに.qbtファイルをアップロードする手順については、アッセイのPDFマニュアルを参照してください。
次世代シーケンシング(NGS)のIon Torrentメソッドでは、テンプレート調製中に各アンプリコンの複数コピーがIon Sphere Particle(ISP)上に作成されます。DNAまたはRNAをシーケンシングする前に、テンプレート陽性ISPの量を知ることが重要です。
Ion Sphere品質管理キットは、Ion Personal Genome Machine(PGM)またはIon GeneStudio SystemでのNGS分析の前に、Qubit Fluorometerで濃縮ISPを迅速かつ容易に評価するためのキットです。すべてのISPは、緑色蛍光のInvitrogen Alexa Fluor 488標識オリゴヌクレオチドと結合しますが、テンプレート陽性のビーズのみが、赤色蛍光のInvitrogen Alexa Fluor 647標識オリゴヌクレオチドに結合します。
製品 | アッセイ数 | 製品番号 |
Ion Sphere Quality Control Kit(Qubit 4のみ) | 20 |
Qubit Fluorometerで各色素コンジュゲートの蛍光発光を測定し、Excelファイルのテンプレートを用いて、Alexa Fluor 647色素シグナルとAlexa Fluor 488色素シグナルの比からテンプレート陽性のISPの割合を計算します。Qubit蛍光光度計を使用したこの品質管理ステップは、シーケンシングが成功する可能性を判断するのに役立ち、最終的にその後のシーケンシングの時間と費用を節約することができます。
Ion Sphere Particleアッセイの原理
Bの核酸配列は、ISPプライマーとテンプレートの両方に存在し、テンプレートのビーズへの増幅を駆動するために使用され、Aの核酸配列はテンプレート内にのみ存在します。Invitrogen Alexa Fluor色素を使用すると、Alexa Fluor 647(赤色)およびAlexa Fluor 488(緑色)色素で標識されたヌクレオチドからの蛍光シグナルの比率から、テンプレート陽性粒子の相対量を決定できます。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.