Qubit RNA IQアッセイ

RNAの完全性と品質を迅速に評価

Qubit RNA IQアッセイは、RNAサンプルの完全性と品質（IQ）を迅速に評価するために開発されました。1つは大きなRNA、インタクトなRNA、構造化されたRNAに結合し、もう1つは小さなRNA、分解されたRNAに結合する2つの色素を使用します。

RNA品質アッセイ

製品	アッセイ数	製品番号
Qubit RNA IQ Assay Kit	75	Q33221
Qubit RNA IQ Assay Kit	275	Q33222
Qubit RNA IQ標準	1セット	Q33235

シンプルなプロトコル

Qubit RNA IQアッセイを使用するには、RNA IQ標準溶液にわずか1 μLのサンプル（0.5～1.5 μg RNAを含む）を加え、Qubit 4 FluorometerまたはQubit Flex Fluorometerで測定するだけです。特別な取り扱いや面倒なサンプル調製、結果を待つ必要がありません。サンプルのIQスコアは1～10の数字で、サンプル中の大きなRNA分子と小さなRNA分子の割合を表しています。

Qubit RNA IQアッセイの結果

RNA IQスコアは、他のRNA品質スコアと同様に1～10の値で表されます。特許取得済みのアルゴリズムに基づいて、サンプル中の大きなRNAや構造化RNAと小さなRNAの比率を表しています。低スコア（A）は主に小さなRNAからなるサンプル、高スコア（B）は主に大きなRNAおよび／または構造化RNAからなるサンプルであることを示しています。

表に示すように、Qubit RNA IQアッセイは、他社Xの装置Aなどの他のメソッドよりもはるかにシンプルで迅速に使用できます。さらに、Qubit RNA IQスコアは、Bioanalyzer RNAインテグリティナンバー（RNA）よりもRT-qPCRのRNA品質測定と整合性が高いことが、サンプルデータページで実証されています。

Qubit RNA IQアッセイおよび他社製装置Aを使用してRNAサンプルの品質を測定するためのプロトコル

装置およびアッセイ	Qubit 4 FluorometerおよびRNA IQアッセイ	他社Xの装置AおよびRNAナノチップ※
アッセイに必要な装置および試薬※	Qubit 4 Fluorometer	他社Xの装置A
	Qubit RNA IQアッセイキット	アッセイキットB
	ピペッター	ピペッター
	Qubitアッセイチューブ	微量遠心分離機用チューブ
		チッププライミングステーション
		IKAボルテックスミキサー
		微量遠心機
		コンピューター
		加熱ブロックまたはウォーターバス
		RNaseフリー水
装置のセットアップ	Qubit 4 Fluorometerをオンにします	チッププライミングステーションのシリンジを、新しい各DNAキットと交換します
		チッププライミングステーションのベースプレートを調整します
		チッププライミングステーションのシリンジクリップを調整します
		製品Aのチップセレクターを調整します
		ボルテックスミキサーをセットアップします
		チップをセットする前にソフトウェアを起動します
サンプル調製時間	約5分	約30～45分
サンプル調製	1.RNA IQバッファーにRNA IQ色素を追加して、Qubit RNA IQ標準溶液を調製します	1.RNAラダーを調製します
	2.Qubit RNA IQ標準溶液にサンプル[1～20 uL（0.5～1.5 ug）]と標準液を加えます	2.ゲルを調製します（ステップには10分間の遠心分離が含まれます）
		3.ゲル色素混合物を調製します（ステップには10分間の遠心分離が含まれます）
		4.ゲル色素混合物をチップにロードします
		5.チップにマーカーをロードします
		6.RNAラダーとサンプルをロードします（1分間のIKAボルテックスミキサーのステップが含まれます）
サンプルの安定性	約1時間	5分以内にチップを使用します
分析実行時間	1サンプルあたり<4秒	1チップあたり30分
定期的なメンテナンス	なし	シール試験を毎月実施して、チッププライミングステーションの性能を確認します
		電気泳動アッセイの場合：電極クリーナーを使用して、電極を日常的にクリーニングします
		電極は、月に一回、ブラシと蒸留水を使用して徹底的に洗浄します
		イソプロパノールを使用して、集光レンズを月に1回（または液体をこぼした後）洗浄します
メンテナンスに必要な製品	なし	RNaseZAP（電極クリーニング）
* 他社XのユーザーマニュアルおよびサーモフィッシャーサイエンティフィックMAN0017210クイックリファレンスカードから作成。

サンプルデータ

このデータ例から、Qubit RNA IQアッセイの2つの試薬がそれぞれ大きなRNAおよび小さなRNAに対して高い特異性を持ち、大きなRNAの割合が増えるに従ってRNA IQスコアが適切に増加することがわかります。

RNA IQアッセイ試薬の大きなRNAと小さなRNAに対する選択性

100 ng/mL rRNA（E. coli）およびさまざまな量のsiRNA（0～50 ng/μL）を含む3連サンプルを、Qubit 4 FluorometerのQubit RNA IQアッセイでアッセイしました。グラフは、これらのサンプルの（A）相対蛍光単位（RFU）と（B）IQスコアを示しています。このデータは、色素がそれぞれ大きなRNA（rRNAなど）および小さなRNA（siRNAなど）に特異的であり、IQスコアがサンプル中の大きなRNAの割合と強く相関していることを示しています。

このデータ例では、RNase Aに曝露したRNAサンプルは時間の経過とともに分解され、RNA IQスコアが低下することが示されています。予想されるように、RNase Aの投与量が多いほど分解は速くなります。

Qubit RNA IQアッセイで測定したRNase AによるrRNA分解の経時変化

100 ng/mL rRNA溶液のトリプリケートサンプルは、マルチプレックス色素とアッセイバッファーを含む最終アッセイ溶液中で異なる用量のRNase Aとインキュベートしました。（A）RNase Aの投与量が多いほど、60分間でRNAの分解が速くなり、これはRNA IQスコアに反映されています。（B）10 fMのRNase Aに曝露すると、大きなRNAの蛍光は1時間かけて徐々に減少し、小さなRNAの蛍光はそれに対応して増加しました。（C）100 fMのRNase Aに曝露された場合、その変化はより速く起こりました。

サンプルRNA品質データをもっと見る

RNA IQアプリケーションノートをダウンロード

BioProbesの無料の記事を見る：最新のQubitベンチトップ型フルオロメーターでRNA品質を評価

Qubit FluorometryをNanoDrop UV蛍光測定と組み合わせることで、RNAの量、品質、純度を測定できます

RNA分析の信頼性と再現性を高めるには、既知の量、品質、純度のRNAから始める必要があります。Qubit 4 FluorometerまたはQubit Flex FluorometerでのQubit RNA IQアッセイとNanoDrop Spectrophotometerを使用したUV吸光度測定を組み合わせることで、RNAサンプルの量、品質、純度をもっとも迅速かつ容易に評価することができます。

NanoDrop Spectrophotometerに必要なサンプル量はわずか1 μLです。3種類のシンプルな測定により、サンプル中の核酸（260 nm）の総量、タンパク質の汚染（280 nm）、フェノールやその他の溶媒汚染物質（230 nm）を測定できます。

RNA定量には、Qubit RNA XR（extended range）、BR（広範囲）、HS（高感度）アッセイが使用できます。これらのアッセイには、インタクトRNAのみに選択的に結合する色素が含まれているため、純粋なRNAサンプルだけでなく、260 nmで吸収されるDNAを含むサンプルにも使用することができます。

Check out our Qubit 4 fluorometer/NanoDrop One spectrophotometer bundle

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

アンカーリスト