Countess 3 FL自動セルカウンター

Countess 3 FL機器の蛍光機能は細胞カウントに加えて細胞の生存率、アポトーシス、トランスフェクション効率、および蛍光タンパク質発現の評価にもよく使用されます。そのアプリケーションは、自己蛍光したり、蛍光色素で標識できるあらゆる細胞パラメーターにまで広がります。細胞培養の品質管理、CAR-T細胞スクリーニング、CRISPR-Cas9の編集効率、およびその他の蛍光アプリケーションを解説したデータをサンプルデータで見ることができます。

細胞生存率。細胞生存率の評価は日常的な細胞培養において重要なステップであり、正確で効率的なダウンストリームアプリケーションプロセスに必要です。Countess 3 FL蛍光オプションは、ダウンストリームのサンプル分析に先立って迅速かつ容易に実行できる、高感度で特異的な生死判定を提供します。

トリパンブルーは明視野細胞カウントでの生死判定に広く使用されていますが、特定のケースで細胞形態を変化させる場合があります。たとえば、マウス末梢血単核球（PBMC）の死細胞をトリパンブルーで染色すると、膨張して生細胞とは異なる焦点面に沈む場合があるため、正確な検出やカウントが困難になります。蛍光の代替として、Invitrogen ReadyCount Green/Red Viability Stainはacridine orangeとpropidium iodide（AO/PI）を最適化された組成で含んでいます。蛍光染色は細胞の形態を変えることなく、混合細胞集団の生死状態を優れた感度とより高い特異性で示します。

Countess 3 FL自動セルカウンターの蛍光機能により、細胞培養室で蛍光タンパク質を容易に可視化したり、アポトーシスまたは増殖アッセイを行うことができます。 

Countess 3 FL機器には2つの蛍光チャンネルオプションがあり、個々のライトキューブを挿入することで蛍光色を検出します。Countess 3 FL機器では交換可能な14種類のライトキューブから選択できるため、GFPやRFPを発現する細胞の検出に限定されません。 

Countess 3 FLでのこれらの蛍光アプリケーションが可能なInvitrogen EVOS LEDライトキューブは、50,000時間以上の明るい（かつ調整可能な）光源を提供し、経年劣化を最小限に抑えながら一定に保たれます。EVOS LEDライトキューブはコスト効率が高くて環境にやさしく、かつスペクトルが最適化されており、正確な制御、最小限のメンテナンス、および優れた信頼性を実現するよう設計されています。

各キューブにはLED、照明光学系、およびフィルターが含まれます。ライトキューブはユーザー自身で交換でき、Countess 3 FLシステムにより自動的に検出されるため、プラグアンドプレイの簡易性を実現しています。

注記：使用する色素や蛍光タンパク質に基づいてカスタマイズできるよう、Countess 3 FLセルカウンターにライトキューブは付属しておりません。

使用する色素とカウントアプリケーションに適したスペクトルを有するライトキューブをお選びください。ライトキューブは、新たなアプリケーション要件を満たすよう容易に交換でき、いつでも購入できます。幅広い色素に対応しています。

多くの研究者は蛍光タンパク質の検出にGFPおよびRFPを選択しますが、EVOS LEDライトキューブは14種類の選択肢があります。DAPIは、従来から使用されている核染色試薬です。7つの一般的なライトキューブで検出される蛍光色素の例を表に示します。

細胞集団内のアポトーシスと生存率の両方を測定することに関心があるとします。カスパーゼ活性化を測定するCellEvent Caspase-3/7 Green Detection ReagentなどのアポトーシスインジケーターをEVOS GFP 2.0ライトキューブとともに使用できます。また、SYTOX Red Dead Cell Stainなどの生存率色素をEVOS Cy5 2.0ライトキューブとともに使用して、アポトーシスが進んだ死細胞を測定できます。この染色の組み合わせを2つのEVOSライトキューブと合わせると、アポトーシスと生存率のデータを得るための迅速でシンプルなマルチプレックスを実現できます。

蛍光染色は、細胞、特に不均質なサンプルの中の細胞に関する豊富なデータを提供しますが、市販の染色剤を混合、滴定、および適用して最適な性能を得るが難しい場合があります。Invitrogen ReadyCount試薬はベンチ上で安定している蛍光色素で、Countess 3 FL自動セルカウンターで使用するように事前に最適化されています。 

ReadyCount試薬を使用して混合集団内の特定の有核細胞を染色でき、適切なEVOSライトキューブと組み合わせると、複雑さを低減し、カウント間およびサンプル間の再現性を向上させます。10 µLの細胞サンプルと10 µLの染色液を混合し、溶液をCountessチャンバーまたは再利用可能なスライドにロードし、スライドを機器に挿入するだけです。