Countess自動セルカウンターのサンプルデータ

機械学習アルゴリズムは、凝集した細胞やデブリで正確なカウントを提供します。 

Countess 3 FL自動セルカウンターを明視野モードで使用して、サイズが小さくて凝集しやすいRAW（マウスマクロファージ）細胞をカウントしました。生死判別するために、トリパンブルー染色を使用しました。図は生細胞を緑色で、死細胞を赤色で輪郭付けした生画像（左）と、強調画像（右）の両方を示しています。カウントアルゴリズムは、凝集した細胞の細胞境界を識別し、適切にセグメント化して細胞をカウントできます。デブリも認識され、カウントから自動的に除外されます。

明視野および蛍光モードでのマウスPBMCの生存率。 

Countess 3およびCountess 3 FL自動セルカウンターを明視野および蛍光モードで使用して、わずか5 µmほどのマウスPBMCをカウントしました。明視野カウント（左）では、トリパンブルー（0.4%）を使用して生存を識別しました。Countess 3セルカウンターは、生細胞（半透明）を緑色の輪郭（円）で、死細胞（濃く染色）を赤色の輪郭で囲んで細胞の生死を示します。 

蛍光モード（右）では、acridine orange／propidium iodide（AO/PI）アッセイにおいて生死状態の特異性が向上します。AOはすべての有核生細胞を緑色に染色し、EVOS GFP 2.0ライトキューブで検出できます。一方、PIは死細胞を赤色に染色し、EVOS Texas Red 2.0ライトキューブで検出できます。これは、蛍光染色がトリパンブルーよりも正確な生存率測定である一例です。

蛍光モードでのアポトーシス細胞および死細胞の検出。 

USO2（ヒト骨肉腫上皮）細胞を2および4 µMのスタウロスポリンでインキュベーションした後、1：400 CellEvent Caspase-3/7 Green Detection Reagentで標識してアポトーシス細胞を同定し、1：1,000 SYTOX Red Dead Cell Stainで染色してすべての死細胞を示しました。細胞を室温で30分間インキュベーションし、EVOS LEDライトキューブGFP 2.0およびCy5 2.0を取り付けたCountess 3 FL自動セルカウンターでカウントしました。薬剤投与量が増加するのに伴い、緑色と遠赤外シグナルの両方が上昇し、それぞれアポトーシスと細胞死の有意な増加を示しています。両方の染色を示す16%の細胞は3つのすべてのカテゴリーでカウントされるため、4 µLスタウロスポリンでの細胞割合の合計は100%を超えています。

scRNA-SeqおよびscATAC-Seqのためのシングルセルと核の正確な自動カウント。 

FL-based countingを使用したCountess 3 FL自動セルカウンターで核をカウントすると、正確なカウントが得られ、これはシーケンシングにより検証されました。GM12878細胞株（A）およびPBMC（B）から分離された核のFL-based countでは、BF-basedやCountess II機器のカウントよりも多くの核をカウントしました。（C）脳組織から分離した核のFL-based countは正確で、他社のハイスループット自動セルカウンターによるカウントと同等でした。（D）次世代シーケンシング（NGS）により、FL-based countから得られた2,000の標的核の正確なローディングが確認されました。*FL-based countはsoftware update 3以降を搭載したCountess 3 FL機器でご利用になれます。データは 10x Genomics R&D が取得しました。

フローサイトメトリーと自動セルカウントで測定した形質導入効率。 

U2OS細胞をInvitrogen CellLight Nucleus-GFP, BacMam 2.0を使用して形質導入し、36時間インキュベーションしました。フローサイトメトリー（グラフ、左）、およびGFPライトキューブを取り付けたCountess II FL自動セルカウンター（画像、右）で細胞の蛍光タンパク質発現を評価しました。2つの方法で測定した形質導入率はほぼ同一で、49.5%と49%です。

CAR-T細胞培養の品質管理。 

CAR-T細胞をDynabeads Untouched Human T Cells Kitを使用して分離し、Dynabeads Human T-Activator CD3/CD28 for T Cell Expansion and Activationで活性化しました。増殖前後に、細胞をトリパンブルー染色し、Countess 3 FL自動セルカウンターで明視野カウントを使用して細胞培養をモニターしました。画像（左）およびヒストグラム（右）において、T細胞とビーズは自動的に区別され、T細胞は生細胞（緑色）、ビーズは死細胞（赤色）として示されています。必要に応じて、ビーズをサイズと強度に基づいたゲーティングにより手動で除外することもできます。

GFP発現により測定されたレンチウイルスの導入効率。 

Cas9タンパク質を発現しているU2OS細胞をLentiArray CRISPR Positive Control Lentivirus, human HPRT, with GFP、およびネガティブコントロールレンチウイルス（スクランブル、GFP）で、multiplicity of infection（MOI）1および2にて形質導入しました。2日後、GFP発現細胞をCountess II FLセルカウンターでカウントしました。（左）Countess II FLでの代表的なカウント結果の表示。（右）棒グラフはGFP陽性細胞の割合を示しており、形質導入の成功を示唆しています。