Cells stained with Cell Tracker in white plus green mitochondria, red Golgi, and blue nucleus

細胞トラッキング色素は、生細胞における細胞の移動および局在の研究を可能にする無毒で安定したプローブです。CellTracker(短時間)およびQtracker(長時間)は受動的に細胞にロードされ、数世代にわたり維持されますが、隣接する細胞には移行しません。これらの細胞トラッキング色素は、装置のレーザーやフィルターと合致し、抗体や他の細胞解析試薬との共染色に対応するよう、幅広い蛍光色で提供されています。

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細胞トラッカーの特性

短期間の細胞トラッキング長期間の細胞トラッキング
高速ローディング(通常15分~1時間)細胞ローティングは通常1時間
短期間のトラッキング(通常3~6世代または72時間)長期間のトラッキング(通常6~10世代または5~14日)
中程度の光退色耐性高い光退色耐性
中程度の輝度強い輝度
細胞全体にシグナルが分布細胞内で点状蛍光
固定後、抗体ラベリングによるマルチプレックスも容易抗体ラベリングによるマルチプレックスも容易

細胞トラッカーの選択ガイド

 CellTracker色素共通のフィルターセット励起/蛍光(nm)容量カタログ番号
CellTracker Blue CMAC (7-amino-4-Chloromethylcoumarin)CMACDAPI353/4665 mgC2110
CellTracker Blue CMF2HC (4-chloromethyl-6,8-difluoro-7-hydroxycoumarin)Blue CMF2HCDAPI371/4645 mgC12881
CellTracker Violet BMQC (2,3,6,7-tetrahydro-9- bromomethyl-1H,5H-quinolizino( 9,1-gh)coumarin)Violet BMQCDAPI415/5165 x 0.1 mgC10094
CellTracker Green CMFDA (5-chloromethylfluorescein diacetate)Green CMFDAFITC492/51720 x 50 µgC7025
CellTracker Orange CMRAOrange CMRATRITC548/57620 x 50 µgC34551
CellTracker CM-DiICM-DiITRITC553/57020 x 50 µgC7000
CellTracker Red CMTPXCMTPXRhodamine577/60220 x 50 µgC34552
CellTracker Deep RedDeep RedCy5630/65020 x 15 µgC34565
 
共通のフィルターセット
最大蛍光(nm)
容量
カタログ番号
Qtracker 525 Cell Labeling KitGFP or FITC5251キットQ25041MP
Qtracker 565 Cell Labeling Kit5651キットQ25031MP
Qtracker 585 Cell Labeling KitTRITC-A5851キットQ25011MP
Qtracker 605 Cell Labeling Kit6051キットQ25001MP
Qtracker 625 Cell Labeling KitTexas Red6251キットA10198
Qtracker 655 Cell Labeling Kit6551キットQ25021MP
Qtracker 705 Cell Labeling KitCy57051キットQ25061MP
Qtracker 800 Cell Labeling KitCy78001キットQ25071MP
 CellTracker色素共通のフィルターセット励起/蛍光(nm)容量カタログ番号
CellTracker Blue CMAC (7-amino-4-Chloromethylcoumarin)CMACDAPI353/4665 mgC2110
CellTracker Blue CMF2HC (4-chloromethyl-6,8-difluoro-7-hydroxycoumarin)Blue CMF2HCDAPI371/4645 mgC12881
CellTracker Violet BMQC (2,3,6,7-tetrahydro-9- bromomethyl-1H,5H-quinolizino( 9,1-gh)coumarin)Violet BMQCDAPI415/5165 x 0.1 mgC10094
CellTracker Green CMFDA (5-chloromethylfluorescein diacetate)Green CMFDAFITC492/51720 x 50 µgC7025
CellTracker Orange CMRAOrange CMRATRITC548/57620 x 50 µgC34551
CellTracker CM-DiICM-DiITRITC553/57020 x 50 µgC7000
CellTracker Red CMTPXCMTPXRhodamine577/60220 x 50 µgC34552
CellTracker Deep RedDeep RedCy5630/65020 x 15 µgC34565

CellTracker色素

細胞トラッキング色素は、細胞の移動や局在をモニタリングするための最もシンプルなプロセスを提供します。これらの色素は細胞の膜を自由に通過し、チオール基と反応することで細胞不浸透性になります。ただし、CellTracker Deep Redはタンパク質上のアミン基と反応するため、これを除きます。細胞トラッキング色素は複数世代にわたり娘細胞に継承されますが、隣接細胞には移動しません。これらの色素は安定しており、ワーキング濃度において毒性はなく(図1)、生理学的pHでは明るい蛍光を発します(図2、3)。CellTracker色素は幅広い蛍光スペクトルを有しているため、抗体染色とのマルチプレックスが可能です。

図1.CellTracker色素は細胞に毒性はありません。HeLa細胞を、1ウェルあたり2,500細胞の密度で96ウェルプレートに播種しました。翌日、細胞に(3枚別々の96ウェルプレート)Live Cell Imaging Solution(LCIS)中のCellTrackerを1 µMの濃度でロードしました。LCIS中のDMSOを内部コントロールとして細胞のカラムに適用しました。細胞を37℃で60分間インキュベートした後、ローディング媒体を吸引し、細胞を1XのLCISで洗浄して、イメージング用にLCISをウェルに再度追加しました。ウェルの10%の領域をEVOS FL Auto Imaging Systemのスキャン機能を使用してイメージングし、CyQUANT Direct Cell Proliferation Assay reagentを使用して細胞の数を測定しました。この実験プロトコルを2日目と3日目に繰り返し、スキャンして領域イメージをつなぎ合せ、細胞増殖試験の結果をグラフで示しました。
Cells stained white with CellTracker Deep Red, green mitochondria, red Golgi, and blue nucleus
図2.CellTracker Deep Redを使用した生細胞の多重化。CellTracker Deep Red(白色)、CellLight Mitochondrial-GFP, BacMam 2.0(緑色)、CellLight Golgi-RFP, BacMam 2.0(赤色)、およびNucBlue Live ReadyProbes Reagent(青)で処理したHeLa細胞。
Cells stained pink with CellTracker Deep Red, green mitochondria, white filaments, and blue nucleus
図3.CellTracker Deep Redは固定細胞のマルチプレックスに使用可能。CellTracker Deep Red(ピンク色)、CellLight Mitochondrial-GFP, BacMam 2.0(緑色)、anti-vimentinおよびgoat-anti-rabbit Alexa Fluor 750(白色)、NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent(青)で処理したHeLa細胞。

Qtrackerラベル

Qtrackerラベルは細胞の移動と局在を長期間追跡します。これらのプローブは光退色に対する耐性がより高く、細胞分裂のサイクル数を重ねても保持されます。Qtrackerラベルはカスタムターゲティングペプチドを使用しているため、生細胞の細胞質に届き、長期間(6~10世代)にわたり安定した強いシグナルを提供します。隣接する細胞には移動しません。Qtrackerラベルは、1つの励起波長から蛍光を発する8種類のプローブを提供し、抗体染色と容易に組み合わせ可能です。

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図4.Qdotプローブ、色素、および蛍光タンパク質のマルチプレックス。U2-OS細胞をCellLight Plasma Membrane-GFP(緑色)で形質導入し、Qtracker 655 Cell Labeling Kit(マゼンタ色)およびHCS NuclearMask Blue(青色)でラベリングしました。

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.