Search Thermo Fisher Scientific
フローサイトメトリー用細菌カウントおよび計数アッセイ
フローサイトメトリー用細菌カウントおよび計数アッセイには、細菌の同定に使用する複数の蛍光核酸染色剤の混合液と正確なサンプル量の測定を可能にする校正済みビーズ懸濁液が含まれています。 バイオテクノロジー分野の多くの実験手順では、サンプルに含まれる細菌の生細胞と死細胞を正確に検出および計数することが重要です。
細菌の細胞カウントアッセイ
フロー サイトメトリー用 Bacteria Counting Kit は、正確に細菌をカウントします。 このキットには、グラム陰性細菌もグラム陽性細菌も簡単に染色し、きわめて明るい緑色蛍光シグナルを発する親和性の高い核酸染色剤のSYTO® BC が含まれています。 またこのキットには、校正済みのポリスチレン製ビーズ懸濁液も含まれています。 染色された細菌とビーズのシグナルは、どちらも緑色蛍光チャネルで簡単に検出できる上、前方散乱光と蛍光のプロット上で区別できます。 サンプルに含まれる細胞の濃度は、サイトグラムに現れる細菌のシグナルとビーズのシグナル比で測定できます。
)
図1. フローサイトメトリー用 Bacteria Counting Kit を使用した Bacillus cereus の計数 細菌細胞染色剤 SYTO® BC で染色した細菌を、弱い蛍光を発する既知の濃度の 6 µm ポリスチレンビーズスタンダードと混合し、前方散乱光と緑色蛍光の強度による二変量度数分布で表示しました。明確に分離したビーズスタンダード集団（赤色）をリファレンスとして使用し、細菌集団の数をカウントしました
| コンジュゲート | レーザー | Ex/Em* | カタログ番号 | |
|---|---|---|---|---|
| Bacteria Counting Kit | 488 nm | 480/500 nm | B7277 | 製品詳細 |
*励起および蛍光波長を示します。
本製品の参考文献
McIver, AM, et al. (2008) Microbial Oxidation of Naphthalene to cis-1,2-Naphthalene Dihydrodiol Using Naphthalene Dioxygenase in Biphasic Media. Biotechnology Progress 24:593-598.
İleri, N., et al. (2007) Phosphate enrichment and fed-batch operation for prolonged β-lactamase production by Bacillus licheniformis. J. of Applied Micro. (102) 1418–1426.
Berney, M., et al. (2007) Assessment and Interpretation of Bacterial Viability by Using the LIVE/DEAD BacLight Kit in Combination with Flow Cytometry. App. Env. Micro., 73:3283-3290.
El-Nezami, H. et al. (2004) Chemical Moieties and Interactions Involved in the Binding of Zearalenone to the Surface of Lactobacillus rhamnosus Strains GG. J. Agric. Food Chem., 52: 4577–4581.
細菌の細胞カウントおよび生存率アッセイ
LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability and Bacteria Counting Kit は、フローサイトメトリーを使用してさまざまな細菌の混合サンプルからも生細胞と死細胞を正確に区別および計数することができます。 このキットは、2 種類の核酸染色剤（緑色蛍光の SYTO® 9 色素と赤色蛍光のPropidium iodide）の混合液を使用して細胞の生存率を測定し、校正済みビーズ懸濁液を使用してサンプルを正確に定量します。
図2。 LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability and Bacteria Counting Kit を使用した培養細菌の解析。黄色ブドウ球菌（パネルA、C）と大腸菌（パネルB、D）の生細胞（未処理）と死細胞（アルコール処理済）の懸濁液を SYTO® 9 核酸染色剤とPropidium iodideで染色し、キットのプロトコールに従ってフローサイトメトリーで解析しました。 緑色または赤色蛍光と側方散乱光のサイトグラム（パネル A、B）で、細菌集団（左枠）とビーズ集団（右枠）をゲーティングしました。 次に、各サイトグラムの細菌集団のイベントを、赤色蛍光と緑色蛍光のサイトグラム（パネル C、D）で示しました。 生存および死滅バクテリア/mL は、どちらが、生存および死滅母集団がもっとも分離を示すかによって異なりますが、蛍光対サイドスキャターサイトグラムまたは緑蛍光対赤蛍光サイトグラムから計算できます。 これらのサイトグラムの生存および死滅母集団の位置は、細胞タイプおよびグラム特性によっても異なることがあります。 サンプルによっては、特定の領域から外れたイベントが表示されることがあります（パネル D 参照）。これらは、適切に評価する必要があります。
*励起および蛍光波長を示します。 L = 生細胞、D = 死細胞
本製品の参考文献
Kramer, M., et al. (2009) Quantification of live and dead probiotic bacteria in lyophilised product by real-time PCR and by flow cytometry. App.Micro. Biotech. 84:1137-1147.
Pascaud, A., et al. (2009) A fluorescence-based assay for measuring the viable cell concentration of mixed microbial communities in soil. J. Micro. Methods 76:81-87.
図2。 LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability and Bacteria Counting Kit を使用した培養細菌の解析。黄色ブドウ球菌（パネルA、C）と大腸菌（パネルB、D）の生細胞（未処理）と死細胞（アルコール処理済）の懸濁液を SYTO® 9 核酸染色剤とPropidium iodideで染色し、キットのプロトコールに従ってフローサイトメトリーで解析しました。 緑色または赤色蛍光と側方散乱光のサイトグラム（パネル A、B）で、細菌集団（左枠）とビーズ集団（右枠）をゲーティングしました。 次に、各サイトグラムの細菌集団のイベントを、赤色蛍光と緑色蛍光のサイトグラム（パネル C、D）で示しました。 生存および死滅バクテリア/mL は、どちらが、生存および死滅母集団がもっとも分離を示すかによって異なりますが、蛍光対サイドスキャターサイトグラムまたは緑蛍光対赤蛍光サイトグラムから計算できます。 これらのサイトグラムの生存および死滅母集団の位置は、細胞タイプおよびグラム特性によっても異なることがあります。 サンプルによっては、特定の領域から外れたイベントが表示されることがあります（パネル D 参照）。これらは、適切に評価する必要があります。
)
| 製品 | レーザー | Ex/Em* | アポトーシス細胞の染色 | 死細胞の染色 | カタログ番号 | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability and Bacteria Counting Kit | 488 nm | 488 nm 480/500 nm（L）、 490/635 nm（D） | SYTO®9 | Propidium iodide | L34856 |  |
本製品の参考文献
F. Hegler and A. Kappler (2010) Cryopreservation of anoxygenic phototrophic Fe(II)-oxidizing bacteria. Cryopreservation 61:158-160.
Orth, R. et al, (2010) An efficient method for enumerating oral spirochetes using flow cytometry. J. Micro. Methods. 80:123-128.Kramer, M., et al. (2009) Quantification of live and dead probiotic bacteria in lyophilised product by real-time PCR and by flow cytometry. App.Micro. Biotech. 84:1137-1147.
Pascaud, A., et al. (2009) A fluorescence-based assay for measuring the viable cell concentration of mixed microbial communities in soil. J. Micro. Methods 76:81-87.
Resources
Fluorophore and reagent selection guide for flow cytometry
Download Flow Cytometry Protocols Handbook
Spectral Flow Cytometry Fundamentals
Invitrogen eBioscience Resources—Selection guides, Best Protocols, product performance and more.
Intracellular Staining for Flow Cytometry How-To Video—for detecting cytokines and intranuclear markers.
Flow Cytometry Learning Center—Access flow cytometry educational resources for better experiment planning and execution.
Flow Cytometry Panel Builder—Design your flow cytometry panel with this online tool for a simplified, customizable experience to fit your needs.
5 Steps Resources
Support
Flow Cytometry Support Center—Find technical support recommendations for your flow cytometry workflows, including tips for experimental setup and in-depth troubleshooting help.
Flow Cytometry Panel Design Support—Work with one of our technical sales specialists to discuss your experimental needs and guide you through the process.