フローサイトメトリー用細菌生存率および活性アッセイ

フローサイトメトリー用 LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kit は、細胞膜の完全性に基づく細菌集団の生存率測定に便利な使いやすいキットです。 膜が損なわれた細胞は死細胞またはその過程にある細胞とみなされて赤色に染色され、膜が完全な細胞は緑色に染色されます。

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図1. Micrococcus luteus と Bacillus cereus を、フローサイトメトリー用 LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kit で染色しました。 このキットに同梱の SYTO® 9 とPropidium iodide核酸染色剤でインキュベーションすると、膜が完全な生細胞細菌は緑色蛍光を発し、膜の損なわれた死細胞細菌は赤色蛍光を示します。

*励起および蛍光波長を示します。 L = 生細胞、D = 死細胞


本製品の参考文献

McIver, AM, et al. (2008) Microbial Oxidation of Naphthalene to cis-1,2-Naphthalene Dihydrodiol Using Naphthalene Dioxygenase in Biphasic Media. Biotechnology Progress 24:593-598.

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Berney, M., et al. (2007) Assessment and Interpretation of Bacterial Viability by Using the LIVE/DEAD BacLight Kit in Combination with Flow Cytometry. App. Env. Micro., 73:3283-3290.

El-Nezami, H. et al. (2004) Chemical Moieties and Interactions Involved in the Binding of Zearalenone to the Surface of Lactobacillus rhamnosus Strains GG. J. Agric. Food Chem., 52: 4577–4581.

フローサイトメトリー用 BacLight™ RedoxSensor™ Bacterial Vitality Assay は、オキシダーゼとレダクターゼ活性検出に基づく細菌の cell health と活性測定に効果的な試薬です。 代謝の活発な細菌細胞は、強い蛍光シグナルを発します。 また、BacLight™ RedoxSensor™ Bacterial Vitality Kits は、固定処理にも対応します。

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図2。 BacLight™ RedoxSensor™ Green Bacterial Vitality Kit。黄色ブドウ球菌の生細胞と死細胞の混合液を、100 nM RedoxSensor™ Green 試薬とPropidium iodideで染色しました。 サンプルをフローサイトメトリー解析し、細菌を散乱光でゲーティングして、生細胞集団と膜の損なわれた細胞集団を示しました。 大腸菌でも同様の結果が得られます。

*励起および蛍光波長を示します。 L = 生細胞、D = 死細胞


本製品の参考文献

Yeom, J. et al. (2010) Iron Homeostasis Affects Antibiotic-mediated Cell Death in Pseudomonas Species. Journ. Biol. Chem. 285:22689-22695.

Lyon, DL and JJ Alvarez (2008) Fullerene Water Suspension (nC60) Exerts Antibacterial Effects via ROS-Independent Protein Oxidation. Envir. Sci.Tech. 42:8127-8132.

Kalyuzhnaya, MG, et al. (2008) Real-time detection of actively metabolizing microbes by redox sensing as applied to methylotroph populations in Lake Washington. ISME Journal 2:696-706.

フローサイトメトリー用 BacLight™ Bacterial Membrane Potential Kit は、蛍光膜電位インジケーター色素、DiOC2(3) を使用します。この色素はすべての細菌細胞で緑色蛍光を発しますが、膜電位を維持している正常な細胞ではこの蛍光色素が自己会合して強まり、蛍光シグナルが赤色に変化します。 赤色と緑色の蛍光を発する細菌集団は、フローサイトメーターで簡単に区別できます

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図3。 BacLight™ Bacterial Membrane Potential Kit for flow cytometry. 5 µM carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone（CCCP）を添加・未添加それぞれで30 µM DiOC2(3) で 30 分間染色した黄色ブドウ球菌サンプルは赤色-緑色蛍光のドットプロット。 フローサイトメーターのデータは、対数増幅期で収集しました。

*励起および蛍光波長を示します。


本製品の参考文献

Leys N, et al. (2009) The response of Cupriavidus metallidurans CH34 to spaceflight in the international space station. Antonie Van Leeuwenhoek 96:227-245.

Lyon, DL and JJ Alvarez (2008) Fullerene Water Suspension (nC60) Exerts Antibacterial Effects via ROS-Independent Protein Oxidation. Envir. Sci.Tech. 42:8127-8132.

Rao, SPS, et al. (2008) The protonmotive force is required for maintaining ATP homeostasis and viability of hypoxic, nonreplicating Mycobacterium tuberculosis. PNAS 105:11945-11950.