フローサイトメトリー用酵母生存率および活性アッセイ

フローサイトメトリー用 LIVE/DEAD® FungaLight™ Yeast Viability Kit は、酵母の生細胞と死細胞を数分で簡単かつ正確に区別して計数することができます。 このキットには、SYTO® 9 緑色蛍光核酸染色剤とPropidium iodide赤色蛍光核酸染色剤が含まれています。 これらの染色剤は、スペクトル特性と正常な酵母細胞への浸透度が異なります。

SYTO® 9 染色剤は、単独で使用すると通常、細胞膜が健全か損なわれているかに関わらず、酵母集団のすべての細胞を染色します。 それとは対照的に、propidium iodideは細胞膜が損傷した酵母のみ透過し、両方の色素が存在する場合には、蛍光共鳴エネルギーの移行（FRET）により、SYTO® 9色素蛍光の減少を引き起こします。 その結果、無傷細胞膜の酵母は緑色蛍光に染色され、損傷膜のある細胞の酵母は赤色蛍光に染色されます。

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図1. SYTO® 9 色素とPropidium iodideで染色した Saccharomyces 細胞の懸濁液。 パネル A は、未処理の Saccharomyces 培養細胞をプロトコールに従って洗浄し、SYTO® 9 とPropidium iodideで染色した前方散乱光と側方散乱光のドットプロットです。 領域R1には、酵母細胞に適したサイズの粒子が含まれており、前方散乱光トリガは残屑を排除するように設定されています。 パネルBは、以下の生細胞および熱死細胞の両方の混合物を含む酵母サンプルの解析を表しています。

*励起および蛍光波長を示します。 L = 生細胞、D = 死細胞


本製品の参考文献

Lewis, J.A., et al (2010) Exploiting Natural Variation in Saccharomyces cerevisiae to Identify Genes for Increased Ethanol Resistance. Genetics. doi:10.1534/genetics.110.121871

Steinhilber, D. et al., (2010) Hyperbranched polyglycerols on the nanometer and micrometer scale. バイオマテリアル :–。 doi:10.1016/j.biomaterials.2010.10.010

Aragon, A.D., et al (2008) Characterization of Differentiated Quiescent and Nonquiescent Cells in Yeast Stationary-Phase Cultures. Mol.Biol. Cell. 19:1271-1280.

Rodicio, R. et al. (2008) Dissecting sensor functions in cell wall integrity signaling in Kluyveromyces lactis. Fungal Genetics & Biol. 45:422-435.

FungaLight™ Yeast CFDA, AM/Propidium Iodide Vitality Kit は、細胞膜透過性のエステラーゼ基質と膜の完全性インジケーターを組み合わせ、フローサイトメーターまたは顕微鏡で酵母細胞の活性を評価します。 このキットには、細胞膜透過性のエステラーゼ基質である5-carboxyfluorescein diacetate（CFDA）と、細胞膜非透過性の核酸染色剤であるPropidium iodideが含まれています。 CFDA, AMとPropidium iodideの染色剤を適切に混合すると、細胞膜が健全でエステラーゼ活性を有する酵母は緑色蛍光に染色されますが、細胞膜が損なわれていれば赤色蛍光に染色されます。

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図2。 FungaLight™ CFDA AM/Propidium Iodide Flow Cytometry Yeast Vitality Kit。Saccharomyces 細胞懸濁液を CFDA, AM 色素とPropidium iodideで染色し、BD FACSCalibur™で解析しました。 ドットプロットは、酵母の生細胞とアルコール処理した細胞の混合液サンプルを使用して解析した染色パターンを示しています。 サンプルは、散乱光で酵母集団をゲーティングし、適切な補正を行いました。 エステラーゼ活性と細胞膜の完全性の双方を利用して、活性の高い細胞のイベントを失活した細胞のイベントと区別しました。

*励起および蛍光波長を示します。


本製品の参考文献

Harper, J.C., et al. (2010) Cell-Directed Integration into Three-Dimensional Lipid−Silica Nanostructured Matrices. ACS Nano. 4:5539-5550.