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死細胞から収集したデータでは、実験で使用される不特定多数の試薬と結合する傾向があるため、しばしば偽陽性結果を得ることがあります。 このため、フローサイトメトリー から死細胞を除去することは正確な結果と分析を保証するためにきわめて重要なステップです。 ライフテクノロジーズは、生細胞群と死細胞群を簡単かつ正確に区別する独自のバイオレットレーザー用 Molecular Probes® 蛍光色素を提供しています。
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LIVE/DEAD® Fixable Dead Cell Stain
Fixable Dead Cell Stainsは表面のアミン基と反応し、生細胞の中から除かれます。 一方、死細胞では、細胞質全体のタンパク質が色素で標識されるため、蛍光強度は生細胞に比べて 50 倍以上になります。 ラベリングは共有結合であるため、ラベル後の細胞生存性に依存せず、アルデヒド固定、浸透させることが可能です。サンプルを固定してから分析を実施する研究者に最適です。 ArC™ Amine Reactive Bead Kit は、固定した死細胞の染色に必要なコンペンセーションをセットアップする最適のツールです。
- 生存率の後固定測定
- 正確な細胞内染色測定
- 信頼できる生存率測定
Fixable Dead Cell Stainsを使用するには LIVE/DEAD® Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit の試薬は、Jurkat 細胞の混合液から生細胞（左ピーク）と熱処理細胞（右ピーク）を区別して染色します。 （A）の細胞は固定されていません。（B）の細胞は染色反応後に3.7% ホルムアルデヒドで固定されました。 サンプルの分析には405 nm励起と～525 nm蛍光を使用するフローサイトメトリーが使用されました。
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SYTOX® Blue Nucleic Acid Stain
SYTOX® Blue Dead Cell Stain は、原形質膜の損なわれた細胞には簡単に浸透するものの、正常な細胞には浸透しない、親和性の高い核酸染色剤です。 SYTOX® Blue Dead Cell Stain で短時間インキュベーションした後、405 nm バイオレットレーザーで励起すると、死細胞の核酸は明るい青色蛍光を発します。 この特性により SYTOX® Blue Dead Cell Stain は、シングルステップで簡単に死細胞を定量できるインジケーターとして、バイオレットレーザーを備えたフローサイトメーターに使用できます。
- 核酸染色用の代替のレーザー励起
- バイオレットレーザーを使用したヨウ化プロピジウム（PI）のリプレースメント
- DNA染色用の迅速で使用しやすいプロトコル
SYTOX® Blue Dead Cell Stain と Vybrant® DyeCycle™ Green Stain を使用。 Jurkat 細胞を Vybrant® DyeCycle™ Green Stain で染色した後、膜非透過性の DNA 染色剤SYTOX® Blue Dead Cell Stain で染色しました。405 nm と 488 nm 励起のフローサイトメーターで解析した後、SYTOX® Blue 陰性細胞をゲーティングして死細胞を除去しました。 そのあと細胞サイクルはVybrant® DyeCycle™ Green Stainを使用して評価されました。
CellTrace™ カルセインバイオレットAMはバイオレットレーザーを使用した細胞内エステラーゼ活動の検出に最適な色素です。 単独の試薬としても、また LIVE/DEAD® Violet Viability/Vitality Kit の一部としても提供しています。このキットでは、CellTrace™ Calcein Violet 蛍光色素を死細胞用の青緑色の蛍光反応色素と組み合わせています。 このユニークなキットにより、バイオレットレーザーを使用して生細胞と死細胞の両方を同時に分析することができます。
- バイオレットレーザー用の生細胞染色
- 膜の状態に関係なく生理学的活性を判定
- 非特異的なバックグラウンド染色はほとんどまたは全くなし
加熱処理された細胞と未処理の細胞の混合を使用した、エステラーゼ基質と死細胞の組み合わせ チャイニーズ ハムスター卵巣（CHO）細胞を、LIVE/DEAD® Violet Viability/Vitality Kit（CellTrace™ Calcein Violet, AM と Fixable Violet Dead Cell Stain）のプロトコールに従って染色しました。 細胞は405 nmの励起を使用したフローサイトメトリーにより分析されました。
CountBright™ 細胞絶対数計数用ビーズCountBright™ 細胞絶対数計数用ビーズは、幅広い励起と蛍光波長（UVから635 nm 励起および385nmの蛍光まで）にわたって高いシグナルの蛍光を発するキャリブレーション済みマイクロスフィア溶液です。 CountBright™ 細胞絶対数計数用ビーズは細胞サンプルと混合し、フローサイトメトリーにより分析されます。 ビーズと細胞データを比較し、サンプル中の細胞の絶対数を計算することができます。 CountBright™ ビーズはテストサンプルと混合されているため、絶対細胞数はより正確であり、マルチプラットフォームによる細胞密度よりもシンプルです。 CountBright™ 細胞絶対数計数用ビーズは全血リシスサンプルを含めたあらゆるサンプルタイプに使用できます。
生細胞と死細胞の判別および絶対細胞数計測
530/30 nm バンドパスフィルターで収集したcalcein蛍光シグナルと 610/20 nm バンドパスフィルターで収集したethidium homodimer-1蛍光シグナルのプロットにより、生細胞と死細胞だけでなくカウントビーズも明確に分離します（C36950）。 Jurkat 細胞（ヒト T 細胞白血病）の生細胞と熱処理細胞の混合液を LIVE/DEAD® Viability/Cytotoxicity Kit の試薬で処理しました。このサンプルにカウントビーズを加え、488 nm 励起のフローサイトメトリーで解析しました。