細胞プロセス研究のためのバイオレットレーザー用試薬

バイオレットレーザー（405 nm）は、フローサイトメーターのマルチプレックス性能を高める機能があるため、フローサイトメトリー分野でますます重視されつつあります。 ライフテクノロジーズは、細胞周期、細胞の生存率と活性、増殖、アポトーシスなどの細胞プロセス解析用のバイオレットレーザー試薬の製造におけるリーディングカンパニーです。 これらの試薬を最新型フローサイトメーターのバイオレットレーザーチャネルに使用すると、マルチカラー性能が向上します。 バイオレットレーザーをこれらのパラメータに使用することで、フローサイトメーターの他のチャネルを、イムノフェノタイピングなどの標準的なフローサイトメトリーアプリケーションに活用できます。

Vybrant® DyeCycle™ バイオレット染色

Vybrant® DyeCycle™ バイオレット染色は生細胞におけるDNA選択的な染色です。 この試薬を用いた細胞サイクル分析はクリアな細胞周期分布パターンを示します: G0/G1期（１細胞における1対の染色体1セット）、S期（DNA合成による一定でないDNA量）、G2/M位相（細胞分裂前の1細胞における1対の染色体2セット）。 この生細胞染色は他の染色試薬による同時染色が可能であり、DNA含有量によるセルソーティングと幹細胞side populationの同定を可能にします。

• 生細胞の細胞サイクルの判定
• 幹細胞side populationの同定が可能
• 低い細胞毒性

Vybrant® DyeCycle™ Violet Stain を使用した細胞周期解析。 Vybrant® DyeCycle™ Violet Stain で染色した Jurkat 細胞（生細胞）のヒストグラムで DNA の分布を表示しました。 G0/G1とG2/M期のヒストグラムのピークはS期の分布により分離されます。 405 nm 励起のバイオレットレーザーと 440/40 バンドパスフィルターを使用しました。

FxCycle™ バイオレット染色 FxCycle™ バイオレット染色は、固定細胞の細胞サイクル分析に使用できるバイオレットレーザー励起試薬です。 細胞サイクル分析用のFxCycle™ バイオレットを使用すると、免疫表現型検査、アポトーシス分析、または死細胞識別など他の細胞分析用に488 nmおよび633 nmレーザーが自由に使えるようになり、マルチプレックスの能力が向上します。 FxCycle™ Violet Stain は蛍光スペクトルの幅が狭いため、標準的な色素（Propidium iodide 7-AAD）に比べて他の蛍光チャネルとのオーバーラップが少なく、コンペンセーションが最低限で済むとともにデータの精度が高まります。

• マルチカラー細胞サイクル研究ができる柔軟性
• 488 nm 励起染色試薬の補正は最小限
• タイトな変動係数

マルチパラメータ細胞周期およびイムノフェノタイピング解析。 TF-1 赤芽球をアルコールで一晩固定した後、洗浄し、0.1 % Triton® X-100/PBS/1 % BSA で懸濁しました。その後、Zenon® Alexa Fluor® 488 Rabbit IgGで標識した抗ヒストン H3[pS10] 精製抗体と 、FxCycle™ Violet 染色剤で染色しました。 pH3シグナル（赤）は有糸分裂中の細胞を示しています。

Fixable Dead Cell Stainsは表面のアミン基と反応し、生細胞の中から除かれます。 一方、死細胞では、細胞質全体のタンパク質が色素で標識されるため、蛍光強度は生細胞に比べて 50 倍以上になります。 ラベリングは共有結合であるため、ラベル後の細胞生存性に依存せず、アルデヒド固定、浸透させることが可能です。サンプルを固定してから分析を実施する研究者に最適です。 ArC™ Amine Reactive Bead Kit は、固定した死細胞の染色に必要なコンペンセーションをセットアップする最適のツールです。

• 生存率の後固定測定
• 正確な細胞内染色測定
• 信頼できる生存率測定

Fixable Dead Cell Stainsを使用するには LIVE/DEAD® Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit の試薬は、Jurkat 細胞の混合液から生細胞（左ピーク）と熱処理細胞（右ピーク）を区別して染色します。 （A）の細胞は固定されていません。（B）の細胞は染色反応後に3.7% ホルムアルデヒドで固定されました。 サンプルの分析には405 nm励起と～525 nm蛍光を使用するフローサイトメトリーが使用されました。

SYTOX® Blue Dead Cell Stain は、原形質膜の損なわれた細胞には簡単に浸透するものの、正常な細胞には浸透しない、親和性の高い核酸染色剤です。 SYTOX® Blue Dead Cell Stain で短時間インキュベーションした後、405 nm バイオレットレーザーで励起すると、死細胞の核酸は明るい青色蛍光を発します。 この特性により SYTOX® Blue Dead Cell Stain は、シングルステップで簡単に死細胞を定量できるインジケーターとして、バイオレットレーザーを備えたフローサイトメーターに使用できます。

• 核酸染色用の代替のレーザー励起
• バイオレットレーザーを使用したヨウ化プロピジウム（PI）のリプレースメント
• DNA染色用の迅速で使用しやすいプロトコル

SYTOX® Blue Dead Cell Stain と Vybrant® DyeCycle™ Green Stain を使用。 Jurkat 細胞を Vybrant® DyeCycle™ Green Stain で染色した後、膜非透過性の DNA 染色剤SYTOX® Blue Dead Cell Stain で染色しました。405 nm と 488 nm 励起のフローサイトメーターで解析した後、SYTOX® Blue 陰性細胞をゲーティングして死細胞を除去しました。 そのあと細胞サイクルはVybrant® DyeCycle™ Green Stainを使用して評価されました。

CellTrace™ カルセインバイオレットAM

CellTrace™ カルセインバイオレットAMはバイオレットレーザーを使用した細胞内エステラーゼ活動の検出に最適な色素です。 単独の試薬としても、また LIVE/DEAD® Violet Viability/Vitality Kit の一部としても提供しています。このキットでは、CellTrace™ Calcein Violet 蛍光色素を死細胞用の青緑色の蛍光反応色素と組み合わせています。 このユニークなキットにより、バイオレットレーザーを使用して生細胞と死細胞の両方を同時に分析することができます。

• バイオレットレーザー用の生細胞染色
• 膜の状態に関係なく生理学的活性を判定
• 非特異的なバックグラウンド染色はほとんどまたは全くなし

加熱処理された細胞と未処理の細胞の混合を使用した、エステラーゼ基質と死細胞の組み合わせ チャイニーズ ハムスター卵巣（CHO）細胞を、LIVE/DEAD® Violet Viability/Vitality Kit （CellTrace™ Calcein Violet, AM と Fixable Violet Dead Cell Stain）のプロトコルに従って染色しました。 細胞は405 nmの励起を使用したフローサイトメトリーにより分析されました。

• 正確で一貫した性能 — 変性ステップや厳しい処理は必要ありません
• 簡単な方法—初回や毎回の使用時にも機能し、かかる時間を短縮
• コンテントの豊富な結果 — 細胞形態、抗原、およびdsDNA完全性をよりよく維持

Click-iT™ 技術を使用した細胞増殖のフローサイトメトリー分析 Jurkat 細胞は、10 μM の EdU で 2 時間処理した後、固定および透過処理して Click 反応液で染色して洗浄し、細胞周期解析のために 7-aminoactinomycin D（7-AAD）で対比染色しました。 405 nm レーザー励起、450⁄50 nm および 675⁄20 nm のバンドパスフィルターを使用したフローサイトメーターで細胞を解析しました。

• バイオレットレーザーでの複数のアポトーシスパラメータの検出
• 向上したマルチプレキシング能力
• スタンドアロン試薬または簡単に使いやすいキットとして入手可能

アポトーシス検出用のバイオレット励起DNA染色。 Jurkat 細胞は、10 μM のcamptothecinで 4 時間処理した後、Vybrant® Apoptosis Assay Kit #13 PO-PRO™-1/7-aminoactinomycin D に同梱の試薬で染色しました。細胞は、405 nm と 488 nm 励起のフローサイトメトリーで解析しました。 アポトーシス細胞（A）は生細胞（L）と死細胞（D）とは明らかに区別されます。

生細胞と死細胞の判別および絶対細胞数計測
530/30 nm バンドパスフィルターで収集したcalcein蛍光シグナルと 610/20 nm バンドパスフィルターで収集したethidium homodimer-1蛍光シグナルのプロットにより、生細胞と死細胞だけでなくカウントビーズも明確に分離します（C36950）。 Jurkat 細胞（ヒト T 細胞白血病）の生細胞と熱処理細胞の混合液を LIVE/DEAD® Viability/Cytotoxicity Kit の試薬で処理しました。このサンプルにカウントビーズを加え、488 nm 励起のフローサイトメトリーで解析しました。