siRNA トランスフェクション

今日、遺伝子サイレンシングまたはノックダウンはほとんどの細胞で容易に実施できますが、実験を始める前には考慮すべき点がいくつかあります。

• まず、目的遺伝子に対する siRNA（small interfering RNA）を設計する必要があります。
• 次に、siRNAトランスフェクション法を用いてsiRNAを効率よく細胞へ導入しなければなりません。

siRNAは、siRNAトランスフェクション試薬によって容易に細胞へ導入することができます。哺乳類細胞へ導入された後、siRNA分子はただちにRNA誘導サイレンシング複合体（RNA-induced silencing complex ；RISC)の一部となります。siRNAが持つアンチセンス鎖に導かれ、RISCはターゲットmRNAを分解し、翻訳を阻害します。
続いてRNAi活性を検出するアッセイを行います。RNAiの結果を適切に比較するためにコントロールを設定します。

RNAiの成功は、想定される最大の反応が起こると考えられるタイミングで、適切な量のsiRNAを正しくデリバリーできるかどうかにかかっています。しかし、そのような精度の高い操作は困難なものです。
siRNAによるオフターゲット効果は致命的であり、解析上の問題となることがあります。より良いsiRNAデザイン、より効果的なsiRNAトランスフェクション法が求められています。