NovaBright™化学発光分泌型胎盤アルカリホスファターゼ（SEAP）レポーター遺伝子アッセイ

SEAP Phospha-Light™ EXPおよびSEAP Phospha-Light™キット（従来品）の特長：

• SEAPレポーター遺伝子発現検出用にデザイン
• 培養液または培養物全体（細胞および培養液）のどちらでも測定可能
• 細胞溶解ステップがないため、サンプルの完全性を維持可能
• 簡単かつ迅速なアッセイ（30分以下のアッセイ時間で、1.5時間以内に結果が得られる）
• 広範なリニアダイナミックレンジにより、比色法と比べて3桁以上も高感度
• 独自のバッファーによって内在性アルカリホスファターゼからのシグナルをカットすることで、低バックグラウンドを確保
• プレートリーダーでの読み取りが簡単な持続性のグローシグナルにより、インジェクターが不要で、よりハイスループットなプレートフォーマットへと容易にスケールアップ可能
• フェノールレッドの影響を受けない

新製品SEAP Phospha-Light™ EXPアッセイフォーマットの主な特長：

• Ready-to-useなCSPD®基質および次世代Emerald™エンハンサーを採用
• 簡便性のためアッセイ試薬は2つに限定
• 希釈ステップなし
• 熱失活ステップが大幅に短縮

新しいNovaBright™ Phospha-Light™ EXPキットは、従来のNovaBright™ Phospha-Light™キットや他の市販発光SEAPアッセイキットと比べて、より強いシグナル強度（グラフ1）、より高いS/N比、および最高レベルの感度を実現します。

（クリックで拡大） グラフ1より高いシグナル強度		（クリックで拡大） グラフ2より高いS/N比と最高レベルの感度を得ることができます。
（クリックで拡大） グラフ3SEAPレポーター遺伝子を利用することで、細胞破壊が必要なアッセイでは行いにくい経時的研究やアッセイ開発研究が可能になります。これは、TNFa処理に対するNFkBシグナル伝達の用量反応を各時点で測定した結果です。HEK293細胞へのトランスフェクションは、24ウェル組織培養ディッシュ中で、pNFkB-SEAPコンストラクトを用いて行いました。トランスフェクションから48時間経過後、培地を取り除いてTNFa含有培地と交換しました。再度培地を取り除いた後、NovaBright™ Phospha-Light™–EXPアッセイを使用して、グラフ中に示した時点でのSEAP酵素活性を測定しました。		（クリックで拡大） グラフ4SEAPレポーター遺伝子の発現は、細胞培養液またはその上清を用いてモニタリングするため、当該の培養細胞は他の実験に使うことが可能です。ここでは、フォルスコリン誘導性遺伝子の発現をPhospha-Light™-EXP SEAPアッセイを用いて経時的にモニタリングし、培養液中のSEAP活性を測定するとともに、培養ウェル中に残存した細胞の生存率を Invitrogen PrestoBlue®アッセイで測定した事例を示します。cAMP誘導性SEAPを発現させるためのNIH/3T3細胞へのトランスフェクションは、pCRE-SEAPで、Lipofectamine® LTX with PLUS™ 試薬を用いて行いました。細胞はフォルスコリンで24時間処理して、cAMP産生を誘導しました。

NovaBright™ Phospha-Light™ EXPキット

従来品NovaBright™ Phospha-Light™キット