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进行完整蛋白质分析的原因有很多,包括测定分子质量(在自上而下分析中)和翻译后修饰 (PTM)(例如单克隆抗体糖基化)。完整蛋白质的全面表征通常以已富集或纯化的蛋白质为研究对象。这些蛋白质可通过直接进样或液相色谱 (LC) 结合电喷雾电离 (ESI) 引入质谱仪 (MS)。
直接进样的主要优点是能为信号平均分配更多时间。然而,大多数完整蛋白质混合物在引入 MS 之前需要进行分离,以降低前体离子质谱图复杂性,并较大限度减少离子抑制。这种分离可通过在线或离线 LC 进行。高分辨精确质量数 (HRAM) 分析对于完整蛋白质分析也至关重要。
若要成功进行完整蛋白质分析,必须将样品复杂性降至最低。必须从其他蛋白质和各种蛋白质组中很好地分离出蛋白质,以便尽可能降低完整蛋白质检测的阈值下限。Thermo Scientific ProSwift RP-4H LC 色谱柱是在质谱分析之前分离完整蛋白质的理想选择;按照设计,它们也可在毫升到微升级流量下工作。
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