组蛋白通过翻译后修饰 (PTM) 被修饰，PTM是基因表达的表观遗传学特征。染色质免疫沉淀 (ChIP) 常用于检测基因组单个位点的一些 PTM。肽阵列通常被用于测定和评估抗体的特异性，即仅识别含有靶向修饰的肽。但是，肽阵列不能替代ChIP 实验检测抗体性能，因为CHIP能够在核小体存在下识别经修饰的组蛋白。EpiCypher Inc. 提供了归一化 ChIP 实验 的方法：SNAP-ChIP™（样品归一化和抗体分析 (Sample Normalization and Antibody Profiling)），可用于验证抗体特异性。通过掺入一组半合成经修饰的重组核小体，研究人员可以确定免疫沉淀的效率，以及与panel中的其他组蛋白 PTM（如脱靶）相比，抗体是否与靶标结合。

EpiCypher 正在与赛默飞世尔科技展开独家合作，通过使用 SNAP-ChIP spike-in control panelsl来验证抗体特异性，为组蛋白 PTM 打造出众的 ChIP 抗体。合作的目的是创造经 SNAP-ChIP 验证的组蛋白 PTM 抗体产品panel；通过在 ChIP 抗体验证中建立新的特异性标准，提升研究人员对数据的信心。

经 SNAP-ChIP 验证的抗体

了解更多有关 SNAP-ChIP 验证的信息

阅读我们的宣传彩页，其中解释了spike-in control的依据、它如何影响抗体特异性以及它与 ChIP 有何不同。示例图展示了这种方法对抗体验证和重现性的重要性。

下载彩页

Advanced Verification

Thermo Fisher Scientific is committed to adopting higher validation standards for the Invitrogen antibody portfolio. We have implemented additional specificity tests to help ensure high confidence levels in our products. You can identify the products that have already undergone this testing with the Advanced Verification badge, shown above. This badge can be found in antibody search results and at the top of product webpages. The data supporting the Advanced Verification status can be found in the product specific data galleries. To learn more about our testing standards, please visit Invitrogen Antibody Validation.

SNAP-ChIP 验证数据

在下例中，使用了 SNAP-ChIP K-MetStat™（EpiCypher，19-1001）方法，通过 ChIP 分析了 H3K36me3抗体（货号 MA5-24687）的组蛋白特异性。在正常 ChIP 工作流程中，在 ChIP 检测试剂中加入一组翻译后修饰、带有 DNA 条形码的半合成核小体。

通过 SNAP-ChIP 分析 H3K36me3 的组蛋白特异性

图 1.SNAP-ChIP K-MetStat 分析 H3K36me3。该panel包含了 H3K4、H3K9、H3K27、H3K36 和 H4K20 核小体的无甲基、单甲基、双甲基和三甲基形式，后续可用于定量测定，帮助确定在 ChIP 反应中每种 PTM 真正发生免疫沉淀的数量。MA5-24687 使用 3 µg HEK-293 细胞的染色质进行ChIP检测。通过对 SNAP-ChIP K-MetStat 组合中的每种经修饰核小体（x 轴）进行实时荧光定量 PCR (qPCR) 来确定特异性（左侧的 y 轴；所有的bars均来自来自六次独立 ChIP 实验）。黑条代表抗体效率（右侧的 y 轴；对数），表示免疫沉淀时带有条形码标记 H3K36me3 核小体靶标占起始量的百分比。

在另一个例子中，使用了 SNAP-ChIP K-AcylStat™（EpiCypher，19-1001）方法，在 ChIP 中分析了 H3K27ac抗体（货号 MA5-23516）的组蛋白特异性。在正常 ChIP操作流程中，在 ChIP 检测试剂中掺入一组翻译后修饰、条形码标记的半合成核小体。

SNAP-ChIP K-MetStat 分析 H3K27ac

图 2.SNAP-ChIP K-AcylStat 分析 H3K27ac。该组合包含了未经修饰的对照品和 H3 位点上有单酰基的核小体以及组合 PTM，后续用于定量测定，帮助确定每种 PTM 在 ChIP 反应中发生免疫沉淀的量。MA5-23516 3 µg K-652 细胞染色质进行ChIP 检测。通过对 SNAP-ChIP K-AcylStat panel中的每种经修饰核小体（x 轴）进行实时荧光定量 PCR (qPCR) 来确定特异性（左侧的 y 轴）。黑条代表抗体效率（右侧的 y 轴；对数），表示免疫沉淀时带有条形码标记的H3K27ac 核小体靶标占起始量的百分比。

通过 SNAP-ChIP 抗体验证来验证 Invitrogen 抗体的靶标特异性

已用 SNAP-ChIP 进行验证的 Invitrogen 抗体在搜索结果和相关产品页面上会带有“特异性通过验证”标识。产品页面也会提供通过验证的数据。

*“验证”或类似的表达仅指接受过功能测试的研究用抗体，测试是为了确认该抗体可与指定研究技术配合使用。它不能确保产品经过临床或诊断用途验证。