通过抗体进行蛋白中和或功能阻断的方法，常用来研究细胞表面表达蛋白介导的生物学功能。例如，为了研究特定细胞因子对于信号传导的影响及其他生物学效应，可采用能够特异性结合并减少能够与受体结合的游离细胞因子的抗体；进而下调其生物学效应。中和抗体检测是我们用来验证研究用 Invitrogen 抗体的一种方法。

中和或功能阻断还可用作检测抗体特异性的工具。这种方法背后的原理是：当中和抗体发挥功能阻断特性时，能够充分证明中和抗体与预期靶标结合，进而证明抗体对预期靶标具有特异性。

为了确定中和或功能阻断方法是否适用于特定的检测，我们必须依赖具有可度量输出的明确系统，从而可以定量阻断功能的效应。这类系统可为迁移检测系统、生物活性检测系统，或者任何可测量活性的其它系统。

中和/功能阻断验证数据

在下述实例中，在存在荧光素酶底物的情况下，重组红色萤火虫荧光素酶发光（生物发光，左图）。红色萤火虫荧光素酶抗体可以根据剂量不同程度阻断 RFF 活性，导致活性下降（表现是生物发光强度下降）。

条件允许的情况下，我们将阻断检测与其他支持数据（如免疫印迹分析）相结合，以证明中和抗体能够识别特定分子量的预定蛋白靶标（右图）。在本例中，我们采用免疫印迹法分析了来自于红色萤火虫 (RFF) 荧光素酶、绿色海肾(GR)荧光素酶或未转染的 293 细胞的全细胞裂解物。正如我们预计的那样，红色萤火虫荧光素酶抗体仅检测细胞内表达红色萤火虫荧光素酶蛋白的靶标。根据这些结果，我们确认红色萤火虫荧光素酶发挥了其预期的功能。

红色萤火虫的中和效应
红色萤火虫荧光素酶免疫印迹分析

使用Thermo Scientific Firefly Luc One-Step Glow Assay 分析红色萤火虫 (RFF) 荧光素酶抗体对于纯化的重组 RFF 荧光素酶（来自于日本源氏萤火虫）的中和效应。将重组荧光素酶 (10 ng) 与指定量的 RFF 荧光素酶多克隆抗体（货号 PA1-179）一同孵育至少 30 分钟。 Enzyme activity (RLU) 采用 Thermo Scientific Varioskan Flash 读数仪和 Firefly Luc One-Step Glow Assay Kit（货号 16197）检测荧光素酶活性 (RLU)。此处展示了每个浓度 4 份样品 10 个点的平均 RLU 值 RLU values （± 标准偏差）。

红色萤火虫荧光素酶免疫印迹分析（来源于日本源氏萤火虫）。将10 µg分别来自于未转染(UT) 293细胞系和红色萤火虫(RFF Luc)或绿色海肾荧光素酶(GR Luc)转染的 293细胞系的全细胞裂解物，10 µL PageRuler Plus 预染蛋白分子量标准（货号 26619）上样到 4–20% 的 Tris-HCl 聚丙烯酰氨凝胶上，然后进行电泳。将蛋白转印到 PVDF 膜上并采用 5% BSA/TBST 封闭 1 小时。采用 1:4000 稀释的 RFF 荧光素酶单克隆抗体（货号 PA1-179）在 4°C 震荡平台上孵育膜，在 TBS-0.1% Tween-20 之中洗涤，然后采用预先 1:500 稀释的 (20 ng/mL)山羊抗兔 IgG HRP 二抗（货号 32460）孵育1 小时。洗涤膜，然后采用 SuperSignal West Pico 底物（货号 34080）进行化学发光检测。

除了可采用生物活性中和方法进行抗体特异性检测外，还可利用不同的阻断方法测定特异性。此时，可采用免疫处理肽段（通常丰度较高）的方式进行抗体特异性确认。在免疫印迹应用中，我们通常采用这种对照方式，尤其是在对直接靶向特定磷酸化位点的抗体进行特异性检测时。 

采用中和/阻断方法验证 Invitrogen 抗体的靶标特异性

通过中和/阻断方法验证的 Invitrogen 抗体在搜索结果及相关产品页面上会显示“特异性通过验证”图标、在各个产品页面将会提供证明验证内容的数据。 

*“验证”或类似的表达仅指用于功能测试的研究用途抗体，旨在确认该抗体是否可用于指定研究技术。它 不能确保产品经过临床或诊断用途验证。