Search Thermo Fisher Scientific
肽段芯片抗体特异性验证通常针对用于研究表观遗传学的抗体执行。许多此类抗体都可以检测调控特定表观遗传学状态的翻译后修饰(PTMs)。肽段芯片检测是我们用来验证研究用 Invitrogen 抗体的一种方法。
采用肽段芯片验证的最常见抗体是带有各种特定修饰的组蛋白,如特定氨基酸磷酸化、乙酰化和甲基化的组蛋白。此外,组蛋白芯片还可用于分析特定抗体修饰的特异性,如我们的用于肽段上的乙酰化赖氨酸的乙酰化单克隆抗体克隆 1C6(货号 MA1-2021)的特异性。
将含有 384 种不同修饰组合的组蛋白肽段分成等份滴定到芯片上,以验证抗体特异性。在常规实验中,采用修饰特异性抗体探测芯片,然后采用 HRP 标记二抗和化学发光检测法检测抗体。在下述实例中,采用 ABfinity 兔单克隆甲基化组蛋白 H3(赖氨酸 4) 抗体(货号710795)特异性检测赖氨酸 4 甲基化时的组蛋白 H3。数据证明其与二甲基化赖氨酸 H3 和甲基化组蛋白赖氨酸 20 的交叉反应性极低。该抗体未检测出组蛋白 H3 的修饰,或其他组蛋白及其修饰。
采用 ABfinity 重组兔单克隆抗体(货号 710795)和其他两家供应商的靶向 H3K4me1 的抗体进行肽段芯片验证。将芯片放入 1:2,000 稀释的一抗溶液中孵育过夜。洗涤后,将芯片放入 1:5,000 稀释的山羊抗兔 IgG (H+L) Superclonal 抗体溶液孵育 1 小时。将芯片与 SuperSignal West Pico 底物(货号 34078)一同孵育,然后采用 myECL 成像仪成像。
通过肽段芯片验证的 Invitrogen 抗体在搜索结果及相关产品页面上会显示“特异性通过验证”图标、在各个产品页面将会提供证明验证内容的数据。