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快速、明确的细胞凋亡检测
Annexin V试剂可用于检测易位的磷脂酰丝氨酸(PS)——细胞凋亡的标志物之一。 Annexin V试剂可以与其他染料（包括核酸染料）联用，以准确分群检测凋亡细胞和非凋亡细胞 我们提供单独试剂或易用试剂盒形式的 Annexin V 偶联物。
我们与 Nexins Research Bv（荧光磷脂酰丝氨酸结合蛋白原开发商）合作，生产具有优异亮度的 Annexin V 偶联物。 这些 Annexin V 试剂为磷脂酰丝氨酸（是细胞凋亡中期标志）的具体化研究提供了快速可靠的检测方法。 凋亡细胞和未凋亡细胞经我们的荧光 Annexin V 偶联物染色后显示出的荧光强度是有差异的，经流式细胞仪测定发现这一差异通常约为100倍。
我们的 Annexin V 试剂的优势包括：
- 可与Invitrogen Alexa Fluor和eFluor染料结合获得更明亮的信号
- 可与所有可用激光结合，以提高多色流式方案组合
- 可选择单独试剂或易用试剂盒形式
用于流式细胞术的 Annexin V 试剂盒（单独试剂）
| 荧光偶联 | 激光器 | 发射 | 推荐滤片 | 尺寸 |
|---|---|---|---|---|
| Annexin V, Alexa Fluor 350 | UV | 442 nm | 450/40 nm | 100 次检测 |
| Annexin V, Pacific Blue | 405/7 nm | 455 nm | 450/50 nm | 100 个反应 |
| Annexin V, Alexa Fluor 488 | 488 nm | 519 nm | 530/30 nm | 100 个反应 |
| Annexin V，荧光 | 488 nm | 518 nm | 530/30 nm | 100 个反应 |
| Annexin V, RPE | 488 nm | 578 nm | 585/42 nm | 50 个反应 |
| Annexin V, Alexa Fluor 555 | 532 nm | 565 nm | 575/26 nm | 100 个反应 |
| Annexin V, Alexa Fluor 568 | 561 nm | 603 nm | 610/20 nm | 100 个反应 |
| Annexin V, Alexa Fluor 594 | 590 nm | 617 nm | 630/20 nm | 100 个反应 |
| Annexin V, APC | 633/5 nm | 665 nm | 661/8 nm | 100 个反应 |
| Annexin V, Alexa Fluor 647 | 633/5 nm | 660 nm | 661/8 nm | 50 个反应 |
| Annexin V，生物素-X 偶联物 | NA | NA | NA | 100 个反应 |
| 所需缓冲液 | ||||
| Annexin 结合缓冲液 (5x) | ||||
含有 Annexin V 试剂的死细胞染色试剂盒
| Annexin V试剂 | 死细胞染色剂 | 适当的最大荧光激发/发射光谱 | 试剂盒内的其他试剂 | 尺寸 | 货 号 | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Annexin V 试剂 | 死细胞染色剂 | |||||
| Annexin V, eFluor 450 | — | 405/450 nm | NA | Annexin 结合缓冲液 (10x) | 50 个反应 | 88-8006-72 |
| 200 个反应 | 88-8006-74 | |||||
| Annexin V, Pacific Blue | SYTOX AADvanced | 415/455 nm | 546/647 nm | Annexin 结合缓冲液 (5x) | 50 个反应 | A35136 |
| Annexin V, Alexa Fluor 488 | PI | 499/521 nm | 535/617 nm | Annexin 结合缓冲液 (5x) | 50 个反应 | V13241 |
| 250 次检测 | V13245 | |||||
| Annexin V, Alexa Fluor 488 | SYTOX Green | 499/521 nm | 503/524 nm | Annexin 结合缓冲液 (5x) | 50 个反应 | V13240 |
| Annexin V，荧光 | PI | 494/518 nm | 535/617 nm | Annexin结合缓冲液 (5x) | 50 个反应 | V13242 |
| Annexin V, PerCP-eFluor 710 | — | 482/710 nm | NA | Annexin 结合缓冲液 (10x) | 50 个反应 | 88-8008-72 |
| 200 个反应 | 88-8008-74 | |||||
| Annexin V, APC | SYTOX Green | 650/660 nm | 503/524 nm | Annexin 结合缓冲液 (5x) | 50 个反应 | V35113 |
| Annexin V, RPE | SYTOX Green | 488/575 nm | 503/524 nm | Annexin 结合缓冲液 (5x) | 50个反应 | V35112 |
| Annexin V, RPE-Cyanine7 | — | 488/767 nm | NA | Annexin 结合缓冲液 (10x) | 50 个反应 | 88-8103-72 |
| 200 个反应 | 88-8013-74 | |||||
| Annexin V, APC | SYTOX Green | 650/660 nm | 503/524 nm | -Annexin 结合缓冲液 (5x) --C12-resazurin (571/585 nm) | 50 个反应 | V35114 |
图1： Annexin V Alexa Fluor 488 试剂。 使用 10 μM 喜树碱处理 Jurkat 细胞（人类白血病 T 细胞）4 小时（右图）或未处理（作为对照，左图）。 然后用Annexin V Alexa Fluor 488处理细胞以鉴定凋亡细胞并用碘化丙啶鉴定死亡细胞，接着使用流式细胞仪分析。 需注意的是，经喜树碱处理的细胞（右图）中，凋亡细胞（用“A”表示）比例明显高于对照细胞（左图）中凋亡的基础水平。 V =活细胞，D=死细胞。
图 2. Annexin V Pacific Blue 试剂 使用 10 µM 喜树碱处理 Jurkat 细胞（人类白血病 T 细胞）4小时。 然后用Pacific Blue Annexin V⁄SYTOX AADvanced 凋亡试剂盒中的试剂处理细胞，并使用流式细胞仪在405 nm和488 nm激发波长处分析。 注意：与对照组细胞群中的凋亡细胞基础水平 (1A) 相比，用喜树碱处理的细胞群中凋亡细胞的百分比更高(1B)。 A=凋亡细胞，V=活细胞，N=坏死细胞。
图 3. Annexin V PE 偶联物。 使用 10 µM 喜树碱诱导 Jurkat 细胞，然后在膜联蛋白结合缓冲液中洗涤细胞并用Annexin V PE 和SYTOX Green染色。 使用流式细胞仪在 488 nm 波长处分析细胞。
我们使用喜树碱处理的 Jurkat 细胞优化该实验以诱导细胞凋亡。 可能需要进行一些修改或与其他细胞类型联用。
- 制备膜联蛋白结合缓冲液： 10 mM HEPES, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, pH 7.4。
- 使用所需方法诱导细胞凋亡。 阴性对照应通过在不存在诱导剂的情况下孵育细胞来制备。
- 孵育期后采集细胞并在冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS）中洗涤。
- 将洗过的细胞沉淀，去除上清液，并将细胞重悬于膜联蛋白结合缓冲液中。 确定细胞密度并使用膜联蛋白结合缓冲液稀释至 ~1 × 106细胞/ 毫升，每次实验制备达100μL悬液。
- 每 100μL 细胞悬浮液中加入 5μL Annexin V偶联物。 您可能还需要添加适当的 Invitrogen 死细胞指示剂，例如碘化丙锭、SYTOX Green 染料或 SYTOX AADvanced 死细胞染料。
- 将细胞在室温下孵育 15 分钟。
- 孵育期后，加入 400μL 膜联蛋白结合缓冲液，轻轻混匀，并将样品保存在冰上。
- 尽快使用流式细胞仪分析染色的细胞。 用 Annexin V 与生物素-X 偶联试剂标记的细胞需要使用二级检测试剂，例如荧光团标记的链霉抗生物素蛋白。 细胞混合物应分成至少两组：仅具有低水平荧光的活细胞和显示出明显更高荧光强度的凋亡细胞。 如果使用死细胞染料，死细胞将被死细胞染料和 Annexin V 试剂标记。
资源
流式胞内染色示意小视频—细胞因子和核内靶点检测
流式细胞术学习中心—获取流式细胞术学习资源，以轻松计划、顺利开展流式实验。
Panel Builder流式配色工具—这款简单、定制化的在线工具可助您轻松解决多色流式实验的配色难题。
5步法实验资源
不可转售。Super Bright聚合物染料由Becton, Dickinson and Company授权销售。