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重组蛋白的定义和信息 |
什么是重组蛋白？
重组蛋白是一种人工制造的蛋白，它是利用被改造成携带目的基因的宿主细胞产生的。重组蛋白与相应天然存在的（野生型）蛋白具有相同的氨基酸序列，或者对其序列进行修饰以改善性质，如溶解度或产量。
重组蛋白被用来做什么？
重组蛋白被广泛应用与生物医学研究、诊断和治疗领域中，并已成为各个科研领域的重要工具。其在实验室中的用途包括：
具有生物活性的重组蛋白
上述应用要求重组蛋白具有生物活性；也就是说，蛋白被细胞识别并在这些细胞中引起变化。生物活性可以在适当的基于细胞的试验中测量，并量化为比活性或 EC50。
重组蛋白的类型
许多在生物学上重要的重组蛋白都可从市场上购得，因此无需表达、纯化和验证常用的生物活性重组蛋白。
重组蛋白的主要类型包括：
重组蛋白生产类别
当为特定应用选择重组蛋白时，了解需要哪种等级的质量控制和文件是有帮助的。
仅供研究使用 (RUO)
研究级重组蛋白适用于多种生命科学研究应用，包括细胞模型开发、维持细胞表型和体外分析。
无动物成分
作为防止动物病原体污染的额外保护措施，无动物来源成分重组蛋白是使用非动物来源的原料制成的。
GMP 重组蛋白
遵循GMP准则生产的重组蛋白经过了广泛的测试，并附有文件，以支持更高要求的项目/应用。
重组蛋白常见问题
生物测定旨在测量给定生长因子或细胞因子的生物活性。在大多数情况下，生物测定是基于细胞的检测，会使用不同的指示细胞，例如原代细胞或细胞系。常用的生物测定包括细胞增殖检测、趋化作用检测、细胞因子生成检测和细胞毒性检测。给定细胞因子的生物活性以 ED50 表达，它代表诱导 50% 最大反应的细胞因子浓度。
The specific activity of a biologically active protein can be determined using the following equation:
1 x 106 / ED50 (ng/mL) = specific activity (units/mg)
The ED50 (AKA EC50) can be found on the CoA for the recombinant protein, but we advise determining the ED50 of a given recombinant protein in your functional assay system.
For additional information on ED50 and its relationship with specific activity, please refer to our Tech Tip.
首先，对容器进行离心，使粉末聚集在管的底部。我们通常建议将其复溶至 0.1 至 1.0 mg/mL 浓度。大多数蛋白可通过加入无菌蒸馏水复溶。但产品数据表或 CoA 将说明何时需要使用水以外的稀释液。也可在这些文档中找到推荐的溶液、载体蛋白浓度和扩展的储存条件。
通常，我们建议将冻干重组蛋白储存在 –20°C 下，但可在 4°C 或室温下短期储存。复溶蛋白溶液时，我们建议您制备至少含 10 μL 蛋白溶液的工作等份试液，并在 –20°C 至 –80°C 下储存。不允许进行多次反复冻融。有关储存冻干和复溶重组蛋白的产品特定说明，请见产品手册、数据表或检验证书 (CoA)。
重组蛋白通常不含载体蛋白或添加剂（如 BSA、HSA、蔗糖等）。因此在冻干过程中，蛋白成品可能为薄薄的，有时肉眼不可见的薄膜形式沉积在小瓶上，而非颗粒状。沉淀物的大小（如果有）与样品瓶中的重组蛋白数量没有直接关系。
为确保蛋白产物的完全回收，在打开冻干重组蛋白瓶之前，建议对其进行离心 20–30 秒，以将可能残留在瓶盖或侧面的任何蛋白聚集到瓶底。复溶后，您可以通过在 SDS-PAGE 上运行少量产品来确认是否存在产品蛋白。通常来说，只要在丙烯酰胺凝胶上上样 10 ng 的蛋白，应该就能看到预期大小的蛋白条带。
了解重组蛋白及其应用的更多信息
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