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TrypLE酶是血清添加和不含血清条件的理想选择,是无动物源性胰蛋白酶样酶的答案。这种酶表现出与胰蛋白酶相似的 pH 值活性谱,在精氨酸和赖氨酸处裂解。由于 TrypLE酶的无动物来源,消除了潜在致病污染物的危害;并经过受控的发酵过程,TrypLE酶可以在任何规模下供应。
TrypLE酶可以无缝地适应您的工作流程。TrypLE酶可以在现有方案中替代胰蛋白酶,这种酶在室温下稳定,对细胞非常温和。因爲 TrypLE酶非常温和,不需要抑制剂。而是仅通过稀释来灭活。此外,TrypLE酶具有与猪胰蛋白酶相似的解离动力学,以及类似的细胞再接种、增殖动力学和长期维持。
TrypLE 产品提供更环保、更经济的细胞解离。有关更多信息,请参阅我们的 TrypLE资源
TrypLE Express | TrypLE Select | |
---|---|---|
特点 | 更温和、更稳定、成本可比性 | 更温和、更稳定、不含动物和人成分 |
酚红 | 可选择含或不含酚红 | 无酚红 |
应用实例 | 通用 | 生物生产/工业应用 |
来源 | 真菌 (无动物来源) | 真菌 (无动物来源) |
生产标准 | cGMP 生产 | cGMP,在专用的无动物源性机器上生产 |
贮存温度 | 室温 | 室温 |
细胞活力更高 | ✓ | ✓ |
灭活方法 | 稀释抑制 | 稀释抑制 |
使用相同的重组真菌胰蛋白酶样蛋白酶,TrypLE Express解离试剂的生产价格与标准胰蛋白酶相当。与 TrypLE Select配方不同,TrypLE Express解离试剂提供含和不含酚红形式。
有关释放时间、稳定性统计和纯度和电接种效率的数据,请参阅下文 TrypLE Express 性能数据。
图1.TrypLE Express 试剂保留细胞表面表位表达。用0.05%胰蛋白酶 (A) 或 TrypLE Express 试剂 (B) 处理 Jurkat 细胞长达20分钟。然后通过流式细胞术用 APC 偶联的抗 CD2 单克隆抗体测量细胞表面 CD2 水平。如图所示,用0.05%胰蛋白酶处理的细胞显示出 CD2 水平明显随时间降低,用 TrypLE Express 试剂处理的细胞无出现可测量的 CD2 损失。
图2.使用 TrypLE试剂的细胞活力优于 Accutase 试剂。
解离时间:10分钟;活力(%) +/- SEM。改编自 Panchision DM 等人Stem Cells, 25:1560 (2007). doi:10.1634/stemcells.2006-0260的数据。
图3.CD24 表位被 TrypLE 保留,而使用木瓜蛋白酶则 CD24 表位完全丧失。改编自 Panchision DM 等人Stem Cells, 25:1560 (2007). doi:10.1634/stemcells.2006-0260的数据。
TrypLE酶简化了您的工作流程。例如,用动物胰蛋白酶或 TrypLE 表达处理并用 OptiPro SFM 再接种的细胞在解离后未清洗。此外,没有使用蛋白酶抑制剂。24 小时后,记录形态变化。如下图所示,TrypLE酶处理的细胞保留其结构,而胰蛋白酶细胞经历进一步的细胞降解。
图4.在没有蛋白酶抑制剂的情况下,TrypLE酶处理的细胞在解离后未清洗时保留其结构。 TrypLE酶处理的细胞在这些条件下保持其形态,但胰蛋白酶处理的细胞经历了进一步的降解。
图1.TrypLE Express 试剂保留细胞表面表位表达。用0.05%胰蛋白酶 (A) 或 TrypLE Express 试剂 (B) 处理 Jurkat 细胞长达20分钟。然后通过流式细胞术用 APC 偶联的抗 CD2 单克隆抗体测量细胞表面 CD2 水平。如图所示,用0.05%胰蛋白酶处理的细胞显示出 CD2 水平明显随时间降低,用 TrypLE Express 试剂处理的细胞无出现可测量的 CD2 损失。
图2.使用 TrypLE试剂的细胞活力优于 Accutase 试剂。
解离时间:10分钟;活力(%) +/- SEM。改编自 Panchision DM 等人Stem Cells, 25:1560 (2007). doi:10.1634/stemcells.2006-0260的数据。
图3.CD24 表位被 TrypLE 保留,而使用木瓜蛋白酶则 CD24 表位完全丧失。改编自 Panchision DM 等人Stem Cells, 25:1560 (2007). doi:10.1634/stemcells.2006-0260的数据。
TrypLE酶简化了您的工作流程。例如,用动物胰蛋白酶或 TrypLE 表达处理并用 OptiPro SFM 再接种的细胞在解离后未清洗。此外,没有使用蛋白酶抑制剂。24 小时后,记录形态变化。如下图所示,TrypLE酶处理的细胞保留其结构,而胰蛋白酶细胞经历进一步的细胞降解。
图4.在没有蛋白酶抑制剂的情况下,TrypLE酶处理的细胞在解离后未清洗时保留其结构。 TrypLE酶处理的细胞在这些条件下保持其形态,但胰蛋白酶处理的细胞经历了进一步的降解。
TrypLE Select酶在专用的无动物源性机器上生产,专为生物生产行业设计。Select酶有两种浓度,1倍和10倍,不含酚红。使用10倍全强度可以迅速温和地分离强贴壁细胞。
有关释放时间、稳定性统计和纯度与电接种效率的数据,请参阅下文 TrypLE Select 数据。
以下细胞系用1倍或10倍浓度的 TrypLE Select酶处理。观察并记录它们的平均细胞释放时间和平均活力。
(1x) | (10x) | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
强度 | 细胞系 | 培养基 | 平均细胞 释放时间 | 平均值 活力 | 平均细胞 释放时间 | 平均值 活力 |
贴壁 | 293F | DMEM + 5% FBS | 2分钟 | 97% | ||
VERO | VP-SFM | 5 分钟 | 100% | |||
VERO | EMEM + 5% FBS | 8 分钟 | 100% | |||
VERO | OptiPRO SFM | 7 分钟 | 98% | |||
CHO-K1 | CHO III A | 7 分钟 | 95% | |||
强贴壁 | PK-15 | EMEM + 10% FBS | 27 分钟 | 98% | 11.7±2.0分钟 | 99.4%±0.3% |
PK-15 | Gibco OptiPRO SFM | 11 分钟 | 99% | |||
MDCK | OptiPRO SFM | 28 分钟 | 98% | 15.3±0.8 分钟 | 98.7%±0.5% | |
MDCK | DMEM + 5% FBS | 15 分钟 | 100% | 8.0±1.3 分钟 | 98.8%±0.5% | |
A549 | DMEM + 10% FBS | 9 分钟 | 98% | 5.2±0.3 分钟 | 99.1%±0.5% | |
MSC | DMEM + 10% MSC FBS | 7.8±1.2 分钟 | 98.7%±1.3% | |||
MSC | Gibco StemPro MSC SFM | 8.7±1.5 分钟 | 97.5%±0.1% |
在不同温度下,与粗猪胰蛋白酶或纯化猪胰蛋白酶相比,TrypLE Select酶表现出优越的稳定性。即使在37℃下工作8周后,TrypLE Select酶仍保持50%的活性,而仅两天后,纯化的猪胰蛋白酶活性迅速下降。
图5.TrypLE Select酶稳定性。在不同的储存温度下,与粗猪胰蛋白酶或纯化猪胰蛋白酶相比,TrypLE Select酶表现出优越的稳定性。即使在37℃下工作8周后,仍保留50%的酶活性。所有样品均避光储存。
图6.纯化猪胰蛋白酶稳定性。在37℃下储存的纯化猪胰蛋白酶样品中的酶活性迅速下降。
用 TrypLE Select酶以每孔100–200个细胞分离的细胞与用猪胰蛋白酶处理的细胞相比,具有更高的接种效率。
图7.TrypLE Select酶可提高接种效率。用 TrypLE Select酶分离的细胞与用猪胰蛋白酶分离的细胞相比,表现出更高的接种效率。
以下细胞系用1倍或10倍浓度的 TrypLE Select酶处理。观察并记录它们的平均细胞释放时间和平均活力。
(1x) | (10x) | |||||
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强度 | 细胞系 | 培养基 | 平均细胞 释放时间 | 平均值 活力 | 平均细胞 释放时间 | 平均值 活力 |
贴壁 | 293F | DMEM + 5% FBS | 2分钟 | 97% | ||
VERO | VP-SFM | 5 分钟 | 100% | |||
VERO | EMEM + 5% FBS | 8 分钟 | 100% | |||
VERO | OptiPRO SFM | 7 分钟 | 98% | |||
CHO-K1 | CHO III A | 7 分钟 | 95% | |||
强贴壁 | PK-15 | EMEM + 10% FBS | 27 分钟 | 98% | 11.7±2.0分钟 | 99.4%±0.3% |
PK-15 | Gibco OptiPRO SFM | 11 分钟 | 99% | |||
MDCK | OptiPRO SFM | 28 分钟 | 98% | 15.3±0.8 分钟 | 98.7%±0.5% | |
MDCK | DMEM + 5% FBS | 15 分钟 | 100% | 8.0±1.3 分钟 | 98.8%±0.5% | |
A549 | DMEM + 10% FBS | 9 分钟 | 98% | 5.2±0.3 分钟 | 99.1%±0.5% | |
MSC | DMEM + 10% MSC FBS | 7.8±1.2 分钟 | 98.7%±1.3% | |||
MSC | Gibco StemPro MSC SFM | 8.7±1.5 分钟 | 97.5%±0.1% |
在不同温度下,与粗猪胰蛋白酶或纯化猪胰蛋白酶相比,TrypLE Select酶表现出优越的稳定性。即使在37℃下工作8周后,TrypLE Select酶仍保持50%的活性,而仅两天后,纯化的猪胰蛋白酶活性迅速下降。
图5.TrypLE Select酶稳定性。在不同的储存温度下,与粗猪胰蛋白酶或纯化猪胰蛋白酶相比,TrypLE Select酶表现出优越的稳定性。即使在37℃下工作8周后,仍保留50%的酶活性。所有样品均避光储存。
图6.纯化猪胰蛋白酶稳定性。在37℃下储存的纯化猪胰蛋白酶样品中的酶活性迅速下降。
用 TrypLE Select酶以每孔100–200个细胞分离的细胞与用猪胰蛋白酶处理的细胞相比,具有更高的接种效率。
图7.TrypLE Select酶可提高接种效率。用 TrypLE Select酶分离的细胞与用猪胰蛋白酶分离的细胞相比,表现出更高的接种效率。
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