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通过去除小鼠脾脏或淋巴结细胞中的非 CD4+ T 细胞（CD8+ T 细胞、B 细胞、单核细胞/巨噬细胞、NK 细胞、树突状细胞、红细胞和粒细胞）来分离未接触的小鼠 CD4+ T 细胞。其他来源的小鼠 CD4+ T 细胞在针对特定应用进行优化后也可用作起始材料。分离的 CD4+ T 细胞无微珠和抗体，适用于任何下游应用
分离原理
向起始样本中加入抗非 CD4+ T 细胞的单克隆抗体混合物。加入小鼠 Depletion Dynabeads，让其在短暂的孵育过程中结合非 CD4+ T 细胞。用磁铁分离微珠结合细胞。丢弃微珠结合细胞并将剩余的未接触小鼠 CD4+ T 细胞用于任何应用
材料描述
Dynabeads 是均匀的超顺磁性聚苯乙烯微珠（直径 4.5 μm），包被了多克隆绵羊抗大鼠 IgG 抗体。
Dynal 小鼠 CD4 阴性分离试剂盒
| 货号 | 114.15D | 114.16D* |
|---|---|---|
| 处理的细胞数 | 高达 1 × 109 | 高达 2 × 108 |
| 小鼠 Depletion Dynabeads | 2 × 10 mL | 4 mL |
| 抗体混合物 | 2 mL | 0.4 mL |
* 入门试剂盒
- 小鼠 Depletion Dynabeads - 以 pH 7.4、含 0.1% 牛血清白蛋白 (BSA) 和 0.02% 叠氮化钠 (NaN3) 的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 的形式提供，浓度为 4 x 108 个微珠/mL。
- 抗体混合物 - 抗体混合物含有抗小鼠 CD45R (B220)、CD11b (MAC-1)、Ter-119、CD16/32 和 CD8 的大鼠单克隆抗体的混合物。以含有 0.02% 叠氮化钠 (NaN3) 的 PBS 的形式提供。
所需的其他材料
- 磁铁
- 热灭活胎牛血清 (FCS)。
- 兼具倾斜和旋转功能的混合器。
- 缓冲液1：含 0.1% BSA 和 2 mM EDTA 的 PBS（不含 Ca2+ 和 Mg2+），pH 7.4。
重要提示：
- BSA 可用 FCS 代替。
- EDTA 可用柠檬酸钠代替。
- 不建议使用含 Ca2+ 或 Mg2+ 的 PBS。
- 本产品不可与磁铁 MPC-1 配合使用。
- 让缓冲液保持低温！
Dynabeads 洗涤程序
使用前，应先洗涤 Dynabeads。
1. 在小瓶中重悬 Dynabeads。
2. 将所需体积的 Dynabeads 转移至试管中。
3. 加入相同体积或至少 1 mL 的缓冲液1并混合。
4. 将试管放入磁铁1分钟并丢弃上清液。
5. 从磁铁中取出试管，在体积与 Dynabeads 初始体积相同的缓冲液1中重悬洗过的 Dynabeads。
样本制备
请参阅从小鼠脾脏或淋巴结制备细胞的推荐程序。
细胞分离的关键步骤
- 使用可以倾斜和旋转试管的混合器，确保 Dynabeads 不会沉淀在管底。
- 对于每 1 x 107 个白细胞，切勿使用少于 200 μL 的 Dynabeads
- 为确保成功分离，请务必遵循磁铁建议。
从脾脏或淋巴结白细胞中分离小鼠 CD4+ T 细胞
此方案基于 1 x 107 个白细胞。细胞数量可以从 1 x 107 增加到 1 x 109（见表1）。
- 将缓冲液1中的 100 μL (1 x 107) 白细胞转移到试管中。
- 加入 20 μL 热灭活 FCS。
- 加入 20 μL 抗体混合物。
- 混合均匀并在 2-8°C 下孵育20分钟。
- 加入 2 mL 缓冲液1来洗涤细胞。倾斜试管几次以混合均匀，并在 2-8°C 下以 300 x g 的速度离心8分钟。丢弃上清液。
- 在 800 μL 缓冲液1中重悬细胞。
- 加入 200 μL 经过预洗涤的小鼠 Depletion Dynabeads。
- 在 18-25°C 下孵育15分钟，同时轻轻倾斜和旋转试管。
- 使用窄口移液器（如 1000 μL 移液器吸头或 5 mL 血清移液器）轻轻吹打5次来重悬微珠结合细胞。
- 加入 1 mL 缓冲液1。
- 将试管放入磁铁2分钟。
- 将上清液转移到新试管中。
上清液含有阴性分离的小鼠 CD4+ T 细胞。
表1. 分离小鼠 T 细胞时每 1 x 107 个起始白细胞所需的体积。
| 每 1 x 107 个白细胞的工作体积 | |
|---|---|
| 细胞体积（第1步） | 100 μL |
| FCS（第2步） | 20 μL |
| 抗体混合物（第3步） | 20 μL |
| 洗涤（第5步） | 2 mL |
| 重悬（第6步） | 800 μL |
| 小鼠 Depletion Dynabeads（第7步） | 200 μL |
| 放入磁铁前加入的体积（第10步） | 1 mL |
| 推荐的 DynaMag™ | DynaMag-15/ DynaMag-50 |
处理更多细胞时，请相应增加所有试剂和体积（例如，对于 2 x 107 个白细胞，使用所有指定试剂体积的两倍体积）。根据经验，在一支 15 mL 试管中可处理多达 5 x 107 个白细胞，在一支 50 mL 试管中可处理多达 2 x 108 个白细胞。
下游应用
分离的小鼠 CD4+ T 细胞可用于细胞培养、流式细胞分析、功能性试验和分子研究等应用。
Invitrogen Dynal AS 符合质量体系标准 ISO 9001:2000 和 ISO 13485:2003。
材料描述
Dynabeads FlowComp™ 是均匀的超顺磁性微珠（直径 2.8 μm）。以 pH 7.4、含 0.1% 牛血清白蛋白 (BSA) 和 0.02% 叠氮化钠 (NaN 3)（作为防腐剂）的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 的形式提供，浓度约为 1 × 10 9 个微珠 (10 mg)/mL。
储存/稳定性
如在未开封的情况下储存于 2-8°C 下，在标签上注明的失效日期前，本产品可一直保持稳定。请在 2-8°C 下储存已开封的小瓶并避免细菌污染。在储存期间和所有操作步骤中，始终让 Dynabeads 处于悬浮液中，因为干燥会导致性能降低。使用前，请充分重悬。
警告和限制
本产品仅用于研究目的。除非另有说明，否则不得用于任何动物或人的治疗或诊断。请遵循适当的实验室指南。本产品含有 0.02% 叠氮化钠（作为防腐剂，具有细胞毒性）。
不要用嘴吹打！
叠氮化钠可与铅和铜管发生反应，形成极易爆炸的金属叠氮化物。通过管道排放进行处置时，请用大量水冲洗，以防止叠氮化物积聚。分析证书 (CoA) 可应要求提供。材料安全数据表 (MSDS) 可在 获得。
材料描述
Dynabeads FlowComp™ 是均匀的超顺磁性微珠（直径 2.8 μm）。以 pH 7.4、含 0.1% 牛血清白蛋白 (BSA) 和 0.02% 叠氮化钠 (NaN 3)（作为防腐剂）的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 的形式提供，浓度约为 1 × 10 9 个微珠 (10 mg)/mL。
储存/稳定性
如在未开封的情况下储存于 2-8°C 下，在标签上注明的失效日期前，本产品可一直保持稳定。请在 2-8°C 下储存已开封的小瓶并避免细菌污染。在储存期间和所有操作步骤中，始终让 Dynabeads 处于悬浮液中，因为干燥会导致性能降低。使用前，请充分重悬。
警告和限制
本产品仅用于研究目的。除非另有说明，否则不得用于任何动物或人的治疗或诊断。请遵循适当的实验室指南。本产品含有 0.02% 叠氮化钠（作为防腐剂，具有细胞毒性）。
不要用嘴吹打！
叠氮化钠可与铅和铜管发生反应，形成极易爆炸的金属叠氮化物。通过管道排放进行处置时，请用大量水冲洗，以防止叠氮化物积聚。分析证书 (CoA) 可应要求提供。材料安全数据表 (MSDS) 可在 获得。
- Comer JE et al (2005).Direct Inhibition of T-Lymphocyte Activation by Anthrax Toxins In Vivo.Infection and Immunity, vol 73 (12), pp. 8275-8281.
- Toscano MA et al (2007).Differential glycosylation of TH1, TH2 and TH-17 effector cells selectively regulates susceptibility to cell death.Nature Immunology, vol 8 (8), pp.825-834.
114.15D_16D.indd 版本004 2009年5月5日
仅供科研使用，不可用于诊断目的。