介绍

直接分离或去除脾脏或淋巴结细胞悬液中的小鼠 T 细胞。为了快速得出一致的蛋白或基因表达分析结果，在 T 细胞仍附着到微珠时进行裂解，并直接进行进一步分子分析。

分离原理

Dynabeads 与试管中的细胞样本混合。Dynabeads 将在短暂的孵育过程中结合靶细胞，然后用磁铁分离微珠结合细胞。

  • 阳性分离 – 丢弃上清液并将微珠结合细胞用于下游应用。
  • 去除 – 丢弃微珠结合细胞并将剩余的未接触细胞用于任何应用。

材料描述

Dynabeads 小鼠 pan T (Thy 1.2) 是均匀的超顺磁性聚苯乙烯微珠（直径 4.5 μm），包被了单克隆抗体。该单克隆抗体对所有常见小鼠品系的外周小鼠 T 细胞、胸腺细胞和上皮内 T 淋巴细胞上表达的 Thy 1.2 抗原具有特异性。5 mL Dynabeads 小鼠 pan B (B220)

提供的材料

5 mL Dynabeads 小鼠 pan T (Thy 1.2)

以 pH 7.4、含 0.1% 牛血清白蛋白 (BSA) 和 0.02% 叠氮化钠 (NaN 3) 的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 的形式提供，浓度为 4 x 10 8 个 Dynabeads/mL。

本产品将处理多达 1 x 109 个白细胞（如脾细胞）。

所需的其他材料

  • 磁铁：我们建议使用 DynaMag™-15（产品编号 123.01D，适用于 1-15 mL 样本）和 DynaMag™-50（产品编号 123.02D，适用于 5-50 mL 样本）。也可使用 Dynal MPC™ 磁铁，但 Dynal MPC-1（产品编号 120.01D）除外。
  • 兼具倾斜和旋转功能的混合器。
  • 分离缓冲液：Gibco 的 PBS，pH 7.4，货号10010-15 或 10010-023，添加了 0.1% BSA。
  • 推荐的培养基：Gibco 的 RPMI 1640 或含 10%
    FCS 的 DMEM，在 CO2 环境中培养。

方案

Dynabeads 洗涤程序

使用前，应先洗涤 Dynabeads。


  1. 在小瓶中重悬 Dynabeads。
  2. 将所需体积的 Dynabeads 转移至试管中。
  3. 加入相同体积或至少 1 mL 的分离缓冲液并混合。
  4. 将试管放入磁铁1分钟并丢弃上清液。
  5. 从磁铁中取出试管，在体积与 Dynabeads 初始体积相同的分离缓冲液中重悬洗过的 Dynabeads。


2.2 样本制备

小鼠细胞通常从脾脏、胸腺或淋巴结中获得，但也可使用其他来源。
有关推荐的样本制备程序，请访问 www.lifetechnologies.com/cellisolation 并点击我们的快速链接。

重要提示

  • 使用可以倾斜和旋转试管的混合器，确保 Dynabeads 不会沉淀在管底。
  • 孵育 Dynabeads 和细胞时，请将温度保持在 2-8°C，以尽量减少吞噬活性和其他代谢过程。
  • 请遵循推荐的体积和孵育时间。
  • 对于每 mL 细胞样本，切勿使用少于 25 μL 的 Dynabeads。
  • 移液时，避免出现气泡。


表1：每 1 mL 样本加入的 Dynabeads 体积。可以根据需要增加体积。

阳性
分离 		去除
样本体积
（高达 1 x 107 个细胞/mL）		 1 mL 1 mL
Dynabeads 体积
25 μL50 μL
每份产品处理的
细胞总数		2 x 1091 x 109



2.3 去除或阳性分离 B 阳性小鼠细胞

  1. 将适当体积的 Dynabeads 加入制备的样本中（有关体积，请参阅表1）。

  2. 在 2-8°C 下孵育20分钟（阳性分离）或30分钟（去除），同时轻轻倾斜和旋转试管。

  3. 将试管放入磁铁2分钟。

  4. 如需去除，将上清液转移至新试管中，待进一步使用。

  5. 如需阳性分离，丢弃上清液并洗涤微珠结合细胞3次（洗涤方法：在分离缓冲液中重悬至原样本体积），然后使用磁铁进行分离。对于分子研究，在细胞仍附着到微珠时进行裂解，并将上清液转移至新试管中以进一步分离核酸、蛋白或进行其他亚细胞分离。


基本信息

Invitrogen Dynal AS 符合质量体系标准 ISO 9001:2000 和 ISO 13485:2003。

材料描述

Dynabeads 小鼠 pan T (Thy 1.2) 是均匀的超顺磁性聚苯乙烯微珠（直径 4.5 μm），包被了单克隆抗体。该单克隆抗体对所有常见小鼠品系的外周小鼠 T 细胞、胸腺细胞和上皮内 T 淋巴细胞上表达的 Thy 1.2 抗原具有特异性。

储存/稳定性

如在未开封的情况下储存于 2-8°C 下，在标签上注明的失效日期前，本产品可一直保持稳定。请在 2-8°C 下储存已开封的小瓶并避免细菌污染。在储存期间和所有操作步骤中，始终让 Dynabeads 处于悬浮液中，因为干燥会导致性能降低。使用前，请充分重悬。

警告和限制

本产品仅用于研究目的。除非另有说明，否则不得用于任何动物或人的治疗或诊断。请遵循适当的实验室指南。本产品含有 0.02% 叠氮化钠（作为防腐剂，具有细胞毒性）。

不要用嘴吹打！

叠氮化钠可与铅和铜管发生反应，形成极易爆炸的金属叠氮化物。通过管道排放进行处置时，请用大量水冲洗，以防止叠氮化物积聚。分析证书 (CoA) 可应要求提供。材料安全数据表 (MSDS) 可在 获得。

参考文献

  1. 1.Xu Z et al (2004) Mechanisms of peritoneal B-1A cells accumulation induced by murine lupus susceptibility locus Sle2.J. Immunol.173:6050-6058.

  2. 2.Yazawa N et al (2003) CD19 regulates innate immunity by the toll-like receptor RP105 signaling in B lymphocytes.Blood 102:1374-1380.

  3. 3.Poe J et al (2004) Severely impaired B lymphocyte proliferation, survival and induction of the c-Myc: Cullin 1 ubiquitin ligase pathway resulting from CD22 deficiency on the C57BL/5 genetic background.J. Immunol.172: 2100-2110.

  4. 4.Metwali A et al (2004) Cutting Edge: Hemokinin has Substance P-like function and expression in inflammation.J.Immunol.172:6528-6532.
114.43D.indd   版本002      2008年12月2日

仅供科研使用，不可用于诊断目的。