介绍

直接分离 (1-3) 或去除 (4,5) 脾脏或淋巴结细胞悬液或含 B 细胞的其他样本中的小鼠 B 细胞。为了快速得出一致的蛋白或基因表达分析结果，在 B 细胞仍附着到微珠时进行裂解，并直接处理以用于进一步分子分析。

分离原理

Dynabeads 与试管中的细胞样本混合。Dynabeads 将在短暂的孵育过程中结合靶细胞，然后用磁铁分离微珠结合细胞。

  • 阳性分离 – 丢弃上清液并将微珠结合细胞用于下游应用。
  • 去除 – 丢弃微珠结合细胞并将剩余的未接触细胞用于任何应用。


材料描述

Dynabeads 小鼠 pan B (B220) 是均匀的超顺磁性聚苯乙烯微珠（直径 4.5 μm），包被了对 B220 抗原具有特异性的单克隆抗体。从 B 细胞分化的早期 pro-B 阶段开始，在整个发育过程中，所有 B 细胞上都会表达 B220（也称为 CD45R）(6)。

提供的材料

5 mL Dynabeads 小鼠 pan B (B220)

以 pH 7.4、含 0.1% 牛血清白蛋白 (BSA) 和 0.02% 叠氮化钠 (NaN3) 的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 的形式提供，浓度为 4 x 108 个 Dynabeads/mL。

本产品将处理多达 1 x 109 个白细胞（如脾细胞）。

所需的其他材料

  • 磁铁：(Dynal MPC™)：有关磁铁建议，请访问 www.lifetechnologies.com/magnets-selection。
  • 兼具倾斜和旋转功能的混合器。
  • 含 0.1% BSA 的 PBS：含 0.1% (w/v) BSA 的 PBS（不含 Ca2+ 和 Mg2+），pH 7.4。
  • 推荐的培养基：RPMI 1640 或含 10% FCS 的 DMEM，在 CO2 环境中培养。

方案

Dynabeads 洗涤程序

使用前，应先洗涤 Dynabeads。

  1.   在小瓶中重悬 Dynabeads。

  2.   将所需体积的 Dynabeads 转移至试管中。

  3.   加入相同体积或至少 1 mL 的 PBS（含 0.1% BSA）并混合。

  4.   将试管放入磁铁1分钟并丢弃上清液。

  5.   从磁铁中取出试管，使用缓冲液将 Dynabeads 重悬至原始体积（第2步）。

2.2 样本制备

小鼠细胞通常从脾脏、胸腺或淋巴结中获得，但也可使用其他来源。
有关推荐的样本制备程序，请访问 www.lifetechnologies.com/cellisolation 并点击我们的快速链接。

重要提示

  • 在孵育和分离过程中，务必让细胞悬液和缓冲液保持低温 (2-8°C)，以防 Dynabeads 被吞噬。
  • 必须轻轻处理微珠结合细胞。不要过度吹打。
  • 不建议使用含 Ca2+ 或 Mg2+ 的 PBS。
  • BSA 可用 HSA 或 FCS 代替。柠檬酸钠可用 EDTA 代替。
  • 请遵循磁铁建议，确保成功分离。


表1：每 1 mL 样本加入的 Dynabeads 体积。可以根据需要增加体积。

阳性
分离 		去除
细胞体积（高达
5 x 106 个白细胞/mL）		 1 mL 1 mL
Dynabeads 体积
（每 5 x 106 个白细胞）
25 μL50 μL
每份产品处理的
白细胞总数		1 x 1095 x 108



2.3 去除或阳性分离 B 阳性小鼠细胞

  1. 将适当体积的 Dynabeads 加入制备的样本中（有关体积，请参阅表1）。

  2. 在 2-8°C 下孵育20分钟（阳性分离）或30分钟（去除），同时轻轻倾斜和旋转试管。

  3. 将试管放入磁铁2分钟。

  4. 如需去除，将上清液转移至新试管中，待进一步使用。

  5. 如需阳性分离，丢弃上清液并洗涤微珠结合细胞3次（洗涤方法：在 PBS 中重悬至原样本体积），然后使用磁铁进行分离。对于分子研究，在细胞仍附着到微珠时进行裂解，并将上清液转移至新试管中以用于进一步 mRNA、蛋白或其他亚细胞分离。


基本信息

Invitrogen Dynal AS 符合质量体系标准 ISO 9001:2000 和 ISO 13485:2003。

材料描述

Dynabeads FlowComp™ 是均匀的超顺磁性微珠（直径 2.8 μm）。以 pH 7.4、含 0.1% 牛血清白蛋白 (BSA) 和 0.02% 叠氮化钠 (NaN 3)（作为防腐剂）的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 的形式提供，浓度约为 1 × 10 9 个微珠 (10 mg)/mL。

储存/稳定性

如在未开封的情况下储存于 2-8°C 下，在标签上注明的失效日期前，本产品可一直保持稳定。请在 2-8°C 下储存已开封的小瓶并避免细菌污染。在储存期间和所有操作步骤中，始终让 Dynabeads 处于悬浮液中，因为干燥会导致性能降低。使用前，请充分重悬。

警告和限制

本产品仅用于研究目的。除非另有说明，否则不得用于任何动物或人的治疗或诊断。请遵循适当的实验室指南。本产品含有 0.02% 叠氮化钠（作为防腐剂，具有细胞毒性）。

不要用嘴吹打！

叠氮化钠可与铅和铜管发生反应，形成极易爆炸的金属叠氮化物。通过管道排放进行处置时，请用大量水冲洗，以防止叠氮化物积聚。分析证书 (CoA) 可应要求提供。材料安全数据表 (MSDS) 可在 获得。

参考文献

  1. Giordia E et al.Modular usage of the HLA-DRA promoter in extra-hematopoietic and hematopoietic cell types of transgenic mice.FEBS Journal 2005; 272:3214–3226

  2. Zeytin H et al.Combination of a Poxvirus-Based Vaccine with a Cyclooxygenase-2 Inhibitor (Celecoxib) Elicits antitumor Immunity and Long-Term Survival in CEA.Tg/MIN Mice.CancerResearch 2004; 64:3668–3678.

  3. Liu et al.Sle1ab Mediates the Aberrant Activation of STAT3 and Ras-ERK Signaling Pathways in B Lymphocytes  The Journal of Immunology, 2005; 174:1630–1637.

  4. Gardby E et al.Impaired CD40 - signalling in CD19-deficient mice selectively affects T2-deperdent isotype switching.Scand.J. Immunol.2001; 53:13-23

  5. Bai YL et al.L-selectin-dependent lymphoid occupancy is required to induce alloantigen-specific tolerance.J  Immunol.2002; 168(4):1579-1589

  6. Hare KJ et al.Induction of thymocyte positive selection does not convey immediate resistance to negative selection.Immunology.2002; 105(2):163-170

  7. Hardy R et al.Resolution and Characterization of Pro-B Pre-Pro-B Cell Stages in Normal Mouse Bone Marrow.J Exp.Med.1991; 173 (5): 1213-1225.
114.41D.indd    版本007      2006年5月5日

仅供科研使用，不可用于诊断目的。