抗体ラベリングキット

このキットには、3回分のラベリング反応を行うために必要なすべてのものが含まれています。共有結合でラベルされたコンジュゲートは、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡、免疫組織化学、一次抗体検出、ELISA、免疫細胞化学、間接FISHなどの複数のアプリケーションに適しています。Zipバッファーを含有するコンポーネントAに1 mLの水を加え、さらに1 mgの抗体を加えて、15分間インキュベートするだけで、抗体をすぐに使用できます（図1）。

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ReadyLabel Antibody Labeling Kitsを使用すると、抗体溶液を事前に精製することなく、市販の抗体や細胞培養上清を迅速かつ簡便にコンジュゲーションすることができます。これは、抗体溶液中に存在する安定化剤タンパク質の不純物を除去する樹脂が、同梱のReadyLabelスピンカラムに含まれているためです（図3）。結果として得られる共有結合抗体コンジュゲートは、フローサイトメトリー、ウェスタンブロッティング、ELISA、および間接FISHに使用できます。

ReadyLabel Kitsは、もっともポピュラーな蛍光色素（Alexa Fluor™ 488、Alexa Fluor™ 647、ビオチン）からお好きなものをお選びいただき、高収率で鮮やかな可溶性コンジュゲートを作製できます。別の色素が必要ですか？その場合は、当社のReadyLabel Flex Kitsをご検討ください。このキットには、色素以外の必要なものすべてを含んでおり、お客様が選択したお好みの色素を使用できます。当社のすべてのReadyLabelキットには2種類のパックサイズがあり、1反応あたり20 μgおよび100 μgのIgGをラベリングするように設計されています。5回のラベリング反応に必要なすべての成分を含んでいます。

ReadyLabel Antibody Labeling Kitsは、マルチプレックス実験において独自の利点を提供します。本キットは、使用可能なIgG種の数によって制約されることが多い二次検出法とは異なり、一次抗体を直接結合させることができます。つまり、より高いレベルのマルチプレックス化を高い柔軟性で実現できます。

本キットは、高品質で明るい色素を使用して設計され、バックグラウンドノイズを最小限に抑えることに重点を置いているため、実験において明瞭で正確なシグナルを実現します。この高い明瞭性は結果の信頼性と正確性を向上させるため、ReadyLabel Antibody Labeling Kitsはマルチプレックスアプリケーションに最適です。

Invitrogen ReadyLabel Antibody Labeling Kit

Large-Scale Antibody Labeling KitsまたはProtein Labeling Kitsはアミン反応性蛍光色素またはハプテンを使用して、ラベルをIgG抗体に共有結合させます。一旦形成された標識とタンパク質間の共有結合は極めて安定で、私たちが一次および二次コンジュゲートの調製に使用しているのと同じケミストリーを使用しています。

約1 mgの精製IgG（Trisなどのアミンを含有しないバッファー約500 μLに溶解）を、あらかじめ測定した量のアミン反応性色素とマグネティックスターラーを含むバイアルに加えるだけです。キットに付属の充填済みスピンカラムにより精製され、高い抗体回収率（通常>85%）を実現します。ラベリングおよび精製の全工程をわずか90分（ハンズオン時間は約15分）で完了できます。degree of labeling（DOL）を測定するには、遊離色素の除去が不可欠です。3回分のコンジュゲーションに必要なすべてのものが提供されています。

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Invitrogen Zenon labeling reagentsは、ヒト、マウス、およびウサギIgG抗体をさまざまなフルオロフォアで非共有的にラベルする、迅速で使いやすいシステムを提供します。ラベル済みZenon FabフラグメントはIgG抗体のFc部位に迅速に結合するように設計されており、抗体の機能を維持します。Zenon Fab-抗体結合は5分未満で起こり、必要な出発物質は少量で、精製ステップは不要です。

新しいInvitrogen Zenon Alexa Fluor Plus labeling reagentsは、抗体結合をスクリーニングするように最適化されており、抗体結合を明るい蛍光で示します。これらの試薬は、迅速で拡張性の高いZenonテクノロジーと優れたAlexa Fluor Plusフルオロフォアを組み合わせているため、より高いシグナル対ノイズ比を実現し、スクリーニング結果の信頼性を高めます。

治療用抗体の結合スクリーニングに関する詳細をお求めですか？
View our Scientific Poster for Antibody Labeling Reagents for Therapeutic Antibody Screening

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一般的にIgG抗体は、抗体の重鎖Fcドメインに位置する特定の保存されたアスパラギン残基に結合した2つのN結合型糖鎖を有しています。これらの糖鎖は主に、2つの末端分岐を持つ複雑な二分岐グリカンであり、構造的に非常に均質で、グリカン分岐の末端配列には非常に高い一貫性があります。抗体のグリカン分岐の大部分は、ガラクトース-N-アセチルグルコサミン（Gal-GlcNAc-）またはN-アセチルグルコサミン（GlcNAc-）で終端しています。β-ガラクトシダーゼにより末端Gal残基を除去することで、大部分の末端GlcNAc標識部位が露出し、その後の酵素的β-ガラクトシルトランスフェラーゼ（GalT）反応を可能にします（図8）。β-ガラクトシダーゼによる末端Gal残基の分解の結果、各N結合型グリカンは重鎖当たり平均して2つの末端GlcNAc残基（抗体当たり4つの末端GlcNAc）を含有します。アジド活性化抗体は、銅フリーのクリックケミストリーを利用して、ジベンゾシクロオクチン（DIBO）官能化プローブでラベリングできます（図9）。

SiteClick法は、ヒト、ウサギ、マウス、ラット、ヤギ、ハムスター、ニワトリなど、さまざまな種の抗体に適合します。さらにSiteClickラベリングは、IgG、IgM、およびIgYなどの複数の抗体クラスで有効です；ニワトリIgY抗体は2つではなく6つの重鎖グリカンを有するため、より程度が高いラベリングが可能です。

SiteClick抗体ラベリングシステムには2つのフォーマットがあります：

• 抗体調製用のアジド修飾成分と、抗体をラベリングするためのsDIBOアルキンの両方を含むキット（完全な反応は図8AおよびBに図示）。
• アジド修飾成分のみを含むキット（図8Aに示された反応の最初の2ステップ）。
• 修飾抗体のラベリングに使用できるさまざまなスタンドアロンsDIBOアルキン試薬（図8Bのステップ）。

このようなフォーマットの柔軟性により、同じ抗体のラベリング程度に影響を与えることなく、使用する蛍光色素を容易に交換できることや、必要に応じて修飾抗体の大量のバッチを調製したり少量をラベリングできることなど、いくつかの利点があり、それでいてラベリングや機能の程度の一貫性を維持します。

色素が抗体の重鎖Fcドメイン上のN結合グリカンに共有結合的かつ部位特異的に結合することにより、抗原結合部位の免疫原性が確保されるため、アミン反応性色素でランダムにラベリングされた抗体と比較して、より効率的な抗原への結合が実現します。SiteClick標識とアミン反応性標識の抗トロポニン1抗体を並べて比較すると、SiteClick標識抗体の感度はアミン反応性標識抗体の感度よりも高くなりました（図10）。

SiteClick抗体ラベリングシステムで抗体をラベリングすることにより、反応の至適化に時間をかけることなく、毎回同じように抗体がラベリングされるという安心感を得られます。つまり、各分子に同じ数の色素が結合し、抗原結合部位が同じように維持されるため、毎回同じ結果を得られます。ラベリングにおける異なる抗体間の一貫性の例を図11に示します。

表1.degree of labelingの研究でラベリングに使用した一次抗体の抗原性（図11）。

*励起／蛍光=最大励起および蛍光（nm）
Alexa Fluor色素およびその他の蛍光色素の詳細は蛍光色素選択ガイドご確認ください

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