M-CSFを介した単球からのマクロファージのin vitro分化

組織マクロファージは単球に由来する場合があります。血液から分離し、血清添加培地で培養すると、付着した単球はマクロファージに分化します。ピュアなマクロファージ培養の場合は、M-CSFなどの因子を加えることをお勧めします。IL-4、IL-10、またはTGF-βなど他の因子を添加すれば、生存率を改善できます。以下のプロトコルはT25またはT75フラスコ用ですが、100 mmの培養皿やプレート用に規模を縮小できます。

• 通気キャップ付きのT25またはT75滅菌フラスコ（例：Nunc EasYFlask細胞培養フラスコ、T25、フィルター、カタログ番号156367）
• RPMI 1640培地（例：BenchStable RPMI 1640培地、カタログ番号A4192301）
• ウシ胎児血清（例：Gibcoウシ胎児血清、カタログ番号26140087、またはウシ胎児血清One Shot format、カタログ番号A3160401）
• L-グルタミン（例：200 mM L-グルタミン、カタログ番号25030149）
• オプション：ペニシリン-ストレプトマイシン（例：Gibcoペニシリン-ストレプトマイシン、カタログ番号15140148）
• M-CSF精製タンパク質（例：Gibco M-CSF組み換えヒトタンパク質、カタログ番号PHC9504）
• オプション：IL-4精製タンパク質（例：IL-4組み換えヒトタンパク質、カタログ番号A42602）
• リン酸緩衝生理食塩水（例：Gibco PBS（10倍濃度）、pH 7.4、カタログ番号70011044）
• EDTA（例：UltraPure 0.5 M EDTA、pH 8.0、カタログ番号15575020）
• 50 mLコニカルチューブ（例：Nunc 50 mLコニカル滅菌済遠心チューブ、カタログ番号339652）
• フローサイトメトリー染色バッファー（例：eBioscienceフローサイトメトリー染色バッファー、カタログ番号00-4222-26）

• リン酸緩衝生理食塩水（例：Gibco PBS（10倍濃度）、pH 7.4、カタログ番号70011044）
• 15 mLまたは50 mLコニカルチューブ（例：Nunc 15 mLコニカル滅菌済遠心チューブ、カタログ番号339650）
• Ficoll-Paque^®密度分離培地
• フローサイトメトリー染色バッファー（例：eBioscienceフローサイトメトリー染色バッファー、カタログ番号00-4222-26）