マウス脾細胞の単離プロトコル

脾臓は、造血、赤血球クリアランス、および免疫機能の場であり、それゆえに、細胞の良好な供給源です。細胞破片、病原体、および不規則な細胞がろ過されます。脾臓は赤血球と白血球の両方の供給源であり、また、顆粒球、単球、マクロファージ、樹状細胞（DC）、NK細胞、T細胞、およびB細胞などいくつかの免疫細胞サブタイプの供給源でもあります。白血球は、粗脾臓調製物中に認められます。DCとマクロファージは、粗細胞調製物からの細胞の酵素的遊離により単離できます。

• 赤血球（RBC）溶解バッファー（例：eBioscience 10X RBC Lysis Buffer (Multi-species)、カタログ番号00-4300-54）
• リン酸緩衝生理食塩水（例：Gibco PBS (10X), pH 7.4、カタログ番号70011044）
• 外科用メスとブレード
• 細胞培養皿（例：Thermo Scientific Nunc EasYDish Dishes, 100 mm、カタログ番号150466）
• 使い捨てのトランスファーピペット（例：FisherBrand Disposable Graduated Transfer Pipettes、カタログ番号137112）
• 50 mLコニカルチューブ（例：Thermo Scientific Nunc 50 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes、カタログ番号339652）
• 70 μm細胞ろ過器（ストレーナー）（例：Fisherbrand Sterile Cell Strainers、カタログ番号22-363-548）
• 5～10 mLシリンジ（例：Fisherbrand Sterile Syringes for Single Use, 10 mL、カタログ番号14-955-459）
• Hankの平衡塩類溶液（例：Gibco Hank’s Balanced Salt Solution, HBSS 10x、カタログ番号14060040）

骨髄細胞の調製

• コラゲナーゼ（例：Gibco Collagenase, Type IV、カタログ番号17104019）
• DNase（例：Thermo Scientific DNase I solution、カタログ番号90083）
• ウシ胎児血清（例：Gibco Fetal Bovine Serum、カタログ番号26140087、またはFetal Bovine Serum One Shot format、カタログ番号A3160401）
• EDTA（例：UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0、カタログ番号15575020）

室温でステップ1～7を実施し、冷緩衝液を用いて氷上でステップ8～12を実施します。