蛍光観察における光退色とその対策

可能な対策

違う色素を試す

色素の中には、照明中の光退色に抵抗性を持つよう作られているものもあります。ご使用になった色素で大幅な光退色が見られた場合、同じ実験条件下で他の色素がより良い性能を発揮するか検討すると良いでしょう。

減光フィルターを使用する

減光フィルターを使用してサンプルに照射される光子を減らす（ただしシグナルも減少します）、または顕微鏡のゲイン設定を変更して照明の光量を落とすこともできます。サンプル間の比較を行いたい場合は、観察する全てのサンプルに対して同じ設定を使用するように気をつけてください。

露光を最小限に抑える

光退色を抑制する最も簡単な方法は、サンプルへの励起光の露光を最小限に抑えることです。そのためには以下のような方法があります：

• 透過光を使用し、観察したい領域を探して焦点を合わせます。続いて蛍光を使用し目的のイメージを取得します。
• 蛍光を使用し、サンプルの領域を探して焦点を合わせます。続いて隣接する領域に移動し、必要なイメージを取得します。
• 観察したい領域を探し、最適露光時間以下で焦点を合わせます。また、ビニングを行って光への露出を最少に抑えることもできます。

光褪色曲線を作成する

蛍光色素の中には、非常に安定しており光退色をそれほど恐れる必要がないものもあります。しかし、中には安定でない蛍光色素も存在します。また、蛍光強度の微小な変化を見たい場合もあるかもしれません。そのような場合は、光褪色曲線が必要になることがあります。光褪色曲線を利用し、実験条件（薬剤処理）に起因するものではなく、光退色による蛍光強度の減少をノーマライズすることができます。

褪色防止試薬入りの封入剤を使用する

固定した細胞のイメージングを行う際の光退色を防止したい場合には、褪色を防止する封入剤が市販されています。褪色防止剤の効果は、お使いの蛍光色素によって異なります。効果を得るためには、複数の封入剤を検討する必要があるかもしれません。封入剤のセクションをご覧ください。