Attune CytPixフローサイトメーター

個々のイベントの画像とそれに由来する形態測定データは、幅広いフローサイトメトリーアプリケーションにほぼ際限なく利点をもたらします。機能には以下があります： 

ゲーティングストラテジーの最適化。手動での確実なシングレットゲーティングでもエラーは発生しやすく、ほぼすべてのフローサイトメトリーアッセイにおいて、主観的な判断が必要です。イメージングはゲートの確認と調整に使用でき、目的のシングルセルだけを含めることが可能です。

ここでは、経験豊富なユーザーがシングレットを確実にゲーティングしました。この手動のシングレットゲートを評価すると、CytPixの画像由来パラメーターであるParticleCount（粒子数）により、このゲートは4%の凝集体を含むことがわかります。

もっとも重要なことはおそらく、これらのイベントには明らかに異なる表現型の細胞が含まれており、二重陽性イベント（特に希少集団）に関して誤った結論を導く可能性があることです。

細胞培養のQC。品質管理（QC）ワークフローに迅速なイメージングを追加することで、プロセスの早期に細胞培養の問題を検出して突き止めることができます。たとえば、あるラボでは、Ramos（リンパ腫）細胞培養の日常的な継代チェックにより、コンフルエントであるにもかかわらず、細胞数と生存率の低下が確認されました。追加調査で著しい微生物汚染が明らかになりましたが、それはいつどこで始まったのでしょうか？

この細胞株はAttune CytPix Flow Cytometerで解析していたため、研究者が画像をさかのぼり、少なくとも5日前の微生物感染が記録できていました。当時、初期の兆候は細胞片として片づけられていましたが、振り返って評価すると、培養中に問題のある細胞と特性を共有していたことが明らかになりました。感染を追跡することは、そのラボにおける、実験に不可欠な細胞株のスクリーニングおよび保護に対して追加手順を確立することに役立ちました。

細胞集団の特性評価。画像から得られた形態学的情報を、フローサイトメトリーデータの豊富な知見に加味できます。たとえば図は、アネキシンVおよびPIを使用した従来のアポトーシスアッセイを示しており、細胞イメージングを追加して各集団の細胞を解析し、形態的に異なる特徴を明らかにしています。これらの洞察は、従来のマルチプレックス染色だけでは得られていないものでした。

細胞間相互作用の解析。 イメージングでは、細胞間の相互作用を確認することさえも可能です。図では、改変CAR T免疫療法細胞をRamos（リンパ腫）細胞と共インキュベートし、Attune CytPixフローサイトメーターで染色、取得、および撮影しました。Q2象限の画像（両方の染色で陽性、単一のイベントとして取得）は、CAR T細胞が明らかにRamos細胞を標的にしていることを示しており、改変細胞の効果が明確に証明されています。

Attune CytPixフローサイトメーターで撮影された細胞をバックゲーティングすることで、形態学的特徴を利用して、フローサイトメトリーデータのみでは明らかにならない興味深いサブ集団を発見することもできます。

たとえば、長期間にわたりインキュベートされた大腸菌細胞は、単一細胞に類似した短いコロニー形成ユニット（CFU）と、不完全な分裂環を持つ伸長構造の2種類のCFUに成長し、各細胞のおおよその長さで不完全な収縮を示します。従来のシングレットゲート（SSC-A vs SSC-H）でも、蛍光ゲート（SSC vs 核染色）でも、これらの集団を十分に分離しません。しかし、Attune CytPixイメージング強化型のフローサイトメーターを使用すれば、画像を表示およびグループ化し、その形態特性に基づいてCFUタイプをゲートできます。