Attune フローサイトメーターの特長

Attuneフローサイトメーターは、医療用画像処理に用いられるような超音波と流体力学的な力を組み合わせることによって、細胞をキャピラリーの中心軸に沿って一直線に整列させることができます。細胞をレーザー照射位置にしっかりと集束させることができると、システムはより多くの光子を収集できるため、サンプル対シース比に関係なくデータ品質を確保できます。

アコースティックフォーカシングはAttune CytPix装置での細胞イメージングに有用で、細胞を正確に配置して鮮明な画像を取得するのに役立ちます。これらの短い動画では、アコースティックフォーカシングなしで撮影した細胞はぼやけて位置がずれているのに対し、アコースティックフォーカシングされて撮影された細胞は明瞭で、視野の中央に位置していました。

アコースティックフォーカシングにより、ラボでは高品質のデータも迅速に取得可能になります。サンプルのスループットレートは12.5 µL/minまたは1,000 µL/minで、これは従来のハイドロダイナミックフォーカシングシステムより最大10倍高速であり、取得速度は35,000イベント／秒です。すなわち、低濃度サンプルや貴重なサンプルなど、すべてのサンプルをより迅速かつ正確に処理し、品質の低下を最小限に抑えられます。

アコースティックフォーカシングは、サンプルフローレートに関係なくばらつきを最小限に抑えるため、スループットと感度の間で妥協する必要はありません。これは、下の細胞周期解析の例で示されており、複数の細胞集団間の蛍光強度の違いを正確に検出することが重要です。

目詰まりを防止し容量測定分析を実現するため、Attune フローサイトメーターは、容量シリンジポンプを使用して、サンプル容量を制御します。このシステムでは、既知の体積で細胞数を容量的にカウント可能で（ゲーティングまたは総イベント）、生細胞／死細胞解析においては死細胞を容易にゲートアウトして、生細胞だけをカウントできます。従来のサイトメーターが最大15PSIの圧力で動作するのとは異なり、Attune フローサイトメーターでは、75PSIの圧力で制御を行うため細胞間相互作用の可能性を低減し、その結果目詰まりを防止します。

Attune フローサイトメーターは、最大4つの空間的に分離したレーザーと16のパラメーターで構成されます。空間的分離は、マルチカラーパネル設計を可能にする自由度を高め、補正を効率化できます。 このシステムは、最大35,000イベント／秒という卓越した速度と、高感度を提供するため、幅広い研究要件を満たします。

高い感度は暗いシグナルとバックグラウンドを区別できるため、ばらつきが低減され、シグナル分離が向上します。1つのピークの蛍光分解能係数の変動は3%未満であり、想定されるMESFは≤80（FITC）、≤30（PE）、≤70（APC）です。他社システムと比較した感度を下に示します。

Attune フローサイトメーターのコンパクトなサイズは、バイオセーフティフード内での使用にも自由度を提供します。これにより、危険なサンプルや未知のサンプルを扱う際の汚染や感染を防止できます。

Attune フローサイトメーターは、長期的に見て、第一級の信頼性と優れた性能をもたらす新しい光学系を特徴としています。流路系や光学系には、不安定性やアライメントの問題、機器のダウンタイムにつながる可能性がある一方、固体レーザーでは、フラットトップのビームプロファイルのおかげで、こうした変化の影響は最小になります。

レーザーのアライメント不良は、従来のフローサイトメーターのユーザーにとって大きな懸念事項です。Attune フローサイトメーターに使用されるフラットトップレーザーは、従来システムのガウシアン分布のレーザーよりも、広いアライメント領域をもつプロファイルを備えています。 フラットトップレーザーはまた、アライメント不良に対する許容度が高いため、高い感度と低いCVを維持できます。

レアイベントを検出するには、信頼できる精度を得るため、多数の細胞を取得する必要があります。Attuneフローサイトメーターを使用すると、希釈サンプルを最大1 mL/minのサンプルフローレートで迅速に処理できるため、60～100 µL/minの最大サンプルフローレートをサポートする従来のサイトメーターよりはるかに高速です。このように、アコースティックフォーカシングは速度と品質の独自の組み合わせを提供し、長時間の取り込み時間の中で希少イベントを収集する時間を大幅に短縮します。

Attuneフローサイトメーターは、高速取得と高感度の両面をサポートし、希少細胞の簡単な検出と、表現型／機能の解析を実現します。当社のフローサイトメトリーラーニングセンターにある、希少イベント検出のためのステップ・バイ・ステップ戦略は、研究の事前分析、分析、およびデータ分析の各段階で最適なアプローチを考えるのに役立ちます。

このカメラは、最大6,000枚／秒の速度でイベント画像を捕捉し、ユーザーは検出器によって記録されたイベントを視覚的に確認できます。ユーザーはイベント画像をリアルタイムで表示してサンプル品質を確認したり、プロトコルを最適化したり、解析用に同定した各細胞集団の形態を記録できます。これは細胞治療アプリケーションでは非常に重要ですが、あらゆるフローサイトメトリーサンプルに適用できます。

既存のフローサイトメトリーのプロトコルを変更したりスループットを低下させたりすることなく、イメージングを追加できます。Attune CytPix フローサイトメーターは標準的なフローサイトメトリーの取得速度を維持しながらも、明瞭な画像を補足できます。アコースティックフォーカシングのメリットはイメージングにも活かされており、シャープで中央に位置する画像が得られるよう細胞を配置するのに役立ちます。

画像ギャラリービューを使用すると、細胞集団を迅速にスキャンして異常値を検出できます。この図では、ざっと見ただけでもダブレットやその他の凝集塊が際立っています。Attune CytPixフローサイトメーターを使用すると、大きな細胞集団の構造的特徴を短時間でハイライトできます。これによりゲートを調整し、凝集塊、不要な細胞、およびデブリを除外しながら、目的細胞を含めることができます。

画像から得られる形態学的情報によると、マルチプレックス染色だけのときと比べ、フローサイトメトリーデータの豊富さが高まります。たとえば、この図はアネキシンVとヨウ化プロピジウム（PI）を用いた従来のアポトーシスアッセイを示しており、細胞イメージングを追加することにより、各集団の細胞を形態的に異なる特徴を明らかにしています。これらの知見は、フローサイトメトリーデータ単独では得られないものでした。