Clonase™ Enzymes—組換え反応

組み換え反応

Gateway®クローニングの中核となるのがエントリークローンです エントリークローンを準備できれば、目的の遺伝子を別のプラスミド（デスティネーションベクター）へ簡単に載せ変え可能です。 この反応を触媒するのはLR Clonase®と呼ばれる酵素ミックスです。LR Clonase®はエントリークローンから目的の遺伝子を切り出し、デスティネーションベクターへ組込むのに必要な酵素活性を持っています。この載せ換えられたベクターが発現クローンとなります（下図参照）。 これと逆の反応は、BP Clonase®酵素ミックスによるBP反応で容易に行うことができます。 LRおよびBP Clonase®酵素ミックスはどちらも使いやすいマスターミックスフォーマットであり、反応間のばらつきがなく、確実に反応を実施できるようになっています。

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Clonase®酵素の種類

Gateway® BP Clonase™酵素ミックス

Gateway BP Clonase™は、Int（Integrase）およびIHF（Integration Host Factor）タンパク質を含みます。PCR産物または発現クローンのattBサイトで挟まれたDNA断片と、ドナーベクター（attPサイトを持つ）との間でのin vitroの組換え反応を触媒し、エントリークローン作製に使用されます。 下記のセレクションガイドをご覧いただき、お客様の実験に最適のBP Clonase™をお選びください。


Gateway® LR Clonase™酵素ミックス

Gateway® LR Clonase™ II酵素ミックスにはInt（Integrase）、IHF（Integration Host Factor）およびXis（Excisionase）タンパク質を含みます。エントリークローン（目的遺伝子の両末端にattL配列が付加されている）とデスティネーションベクター（attR配列を含む）の間でのin vitroの組換え反応を触媒し、発現クローン作製に使用されます。 お客様のアプリケーション、ご希望のフォーマットに合わせ、様々なパッケージのLR Clonase酵素ミックスをご用意しております。 下記のセレクションガイドをご覧いただき、お客様の研究目的に最適なLR Clonase™をお選びください。

  図1

Clonase™の選択ガイド

評価 酵素 フォーマット 利点
ベストLR Clonase™ II Plus酵素ミックス酵素と反応バッファーのミックス
  • 単一または複数のフラグメントを最も効率的にクローニング
  • 困難なクローニングに最適化されています。
  • MultiSite Gateway® Proテクノロジーに対応します
  • 使いやすい単一マスターミックスで、酵素は安定です
  • 反応液量は10 µL
Very goodLR Clonase™ II酵素ミックス酵素と反応バッファーのミックス
  • 単一のフラグメントを効率的にクローニング
  • 使いやすい単一マスターミックスで、ピペット操作を減らし操作ミスをなくします。
  • 使いやすい単一マスターミックスで、酵素は安定です
  • 反応液量は10 µL
良いLR Clonase™酵素酵素
5X反応バッファー
  • 単一のフラグメントのクローニング
ベストBP Clonase™ II酵素ミックス酵素と反応バッファーのミックス
  • 高いクローニング効率でエントリークローンを構築
  • 単一マスターミックスで、ピペット操作を減らし操作ミスをなくします。
  • 使いやすい単一マスターミックスで、酵素は安定です
  • 反応液量は10 µl
良いBR Clonase™酵素酵素
5X反応バッファー
  • 単一のフラグメントのクローニング

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リソース

TOPO® PCRクローニングのカタログGateway®えクローニングのカタログ