Gateway®エントリークローン

• RNAi発現 - レンチウイルスまたはアデノウイルスGateway®ベクターの使用により、多くの哺乳類細胞において効率的なデリバリーが可能で、ステーブルまたは一過性のshRNA発現を行えます。
• ウイルス発現 - 多くの哺乳類細胞型おいて、高レベルな、ステーブルまたは一過性遺伝子発現を行えます。
• In Vitro タンパク質発現 - 特別な装置を使用せず、わずか2時間のうちに、単一反応チューブ内で組換えタンパク質を高収量で調製できます。 マイクログラムからミリグラムレベルのタンパク質合成を達成できるように、反応スケールを選択できます。
• In Vivoビオチン化 - ビオチン化組換えタンパク質の発現、精製、および検出を行う、簡単で効率的な方法です。
• Tag-On-Demand™ Technology - 1つのベクターを用いて、タグ無しタンパク質またはタグ付きタンパク質を生成します。

注1）レンチウイルス発現システム製品をご購入される方には「お客様登録用紙（Lentiviral）」へのご記入をお願いしております。またこのシステムはヒト免疫不全ウイルス（HIV）を改変したベクターを用いています。このシステムを用いて実験（ベクター、組換えウイルス、組換え哺乳類細胞、その他試薬類を扱う操作を含む）を行う際は、文部科学省の「組換えDNA実験指針」および各研究機関の安全委員会の判断に基づいた安全性レベルに従って下さい。実験に際しては「組換えDNA実験指針」を必ずご参照ください。

注2）Drosophila Expression System製品をご購入される方には、「お客様登録用紙（DES）」へのご記入をお願いしております。

注3）このベクターには、InsectSelectタンパク発現システムの技術が含まれています。ご購入される方は、「お客様登録用紙（InsectSelect）」へのご記入をお願いしております。

注4）これらのベクターにはBGHpA配列が含まれています。ご購入される方は、「お客様登録用紙（BGHpA）」へのご記入をお願いしております。

注5）Flp-In製品をご購入される方は、「お客様登録用紙（Flp-In）」へのご記入をお願いしております。

注6）Ultimate ORF Clonesのここのクローンはシークエンスし、GenBankに登録されているcDNA配列を翻訳したアミノ酸配列と同一であることを確かめています。しかし、塩基配列が完全に一致するということはありません。1塩基から数塩基は異なる場合があります。あらかじめご了承ください。

エントリークローンを作製できる3つの方法を以下に示します： A. BPクローニング、B. TOPO®クローニング、C. 制限酵素とリガーゼによるクローニング。 赤い矢印は組み込まれる断片です。 Katzen, F. 2007) Expert Opin Drug Discov 2(4)の図を改変 571–589.

pENTR/D-TOPO®ベクターは、インサートを正しい方向に導入する迅速で効率的なDirectional TOPO®クローニングを採用しています。 これらのベクターにはあらゆるDestinationベクターへの組換えに必要なattL配列が含まれるほか、一部のベクターには発現後にネイティブタンパク質を調製するためのTEVプロテアーゼ切断部位が含まれます（図1）。

図1 Directional TOPO®クローニングに使用でき、多数のGateway®発現ベクターに直接クローニングできるpENTR™ベクターが数種類あります。

pCR®8/GW/TOPO®ベクターは、TOPO®-TAクローニングを効率的に行えます。 これらのベクターは以下のような多目的使用を容易にします： 様々なGateway® Destinationベクターへの迅速な組換え、簡便な配列決定、スペクチノマイシン耐性による大腸菌のセレクション、および隣接したEcoRI部位によるインサートDNAの簡単な切断（ 図2）。

図 2 pCR®8/GW/TOPO®エントリーベクターを使用すれば、TOPO® TA Cloning®により複数のアプリケーションに対応できるGateway®エントリークローンを作成できます。