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自分の望む順序と方向で2、3または4 DNA断片を1つのコンストラクトに容易にまた正確に組み立てられるとしたらどうでしょう。 1つのプラスミドにパスウェイや機能複合体の主要な要素を再構成することを想像してください。 いまや、このことすべて、そしてそれ以上のことができるようになりました。
制限酵素を用いたサブクローニングと比較して、Gateway®の組換え技術は高効率で簡単かつ効果的で、時間と労力を削減します(表1)。 さらに、サブクローニングなしで、目的の順序、方向で正確、効率的に複数のDNA断片をクローニングする柔軟性を併せ持つMultisite Gateway®テクノロジーは、タンパク質発現に理想的です。
ステップ | Gateway®組み換えクローニング | 制限酵素でのサブクローニング |
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既存プライマーですか? | はい | いいえ |
ベクターはクローニングの準備ができていますか? | はい | いいえ |
ライゲーション試薬は含まれていますか? | はい | いいえ |
コンピテントセルは別途用意していますか? | 含む | 別々に購入: 0 時間 調製: 最大 6 時間 |
ベクターは精製されていますか? | いいえ | はい |
PCR 断片クリーンアップは? | いいえ | はい |
組み換え効率 | 最大 99% | ~50% |
発現ベクター*へのクローニンング時間 | 65 分 | 最大 24 時間 |
*両者で共通のミニプレップに要する時間は除きます
MultiSite Gateway®テクノロジーにより、パスウェイ再構築、複数遺伝子の発現と調節、タンパク質相互作用研究などが可能となります。 お客様独自のアプリケーション用にプロモーター、タグおよび遺伝子を交換および組み合わせたり、スクリーニングのために様々な要素のライブラリー構築を容易に行えます。
MultiSite Gateway® Pro キットの使用データを参照してください
Gateway® エントリ クローンにプロモータ/タグエレメントを加える |
タグの組み合わせ |
生物学あるいは生化学プロセスを構築 |
酵素経路の発現 |
複数サブユニットタンパク質複合体の発現 |
遺伝子ノックダウンとレスキュー |
コトランスフェクションを用いない最適化された多重遺伝子導入 |
異なるプロモータからの発現をスクリーニング |
翻訳ドメインシャッフリング |
異なる発現因子を使用した可変性の遺伝子発現レベル |
関連製品 | テクニカルサポート
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2、3または4個のDNA断片を同時に1つのベクターに組み込む
MultiSite Gateway® Pro Kits:
図1. MultiSite Gateway® Proテクノジーの概要
図 2 MultiSite Gateway® Proテクノロジーを使用したヒト細胞における複数遺伝子の発現研究。 YFP、CFPの遺伝子、及びCMV、EF-1αプロモーターをコードするエントリークローンがpcDNA™ 6.2/V5-PL-DEST(A、CおよびE)またはpcDNA™ 6.2/V5-DEST(BおよびD)に組み換えられています。 その結果得られる発現クローンはHeLa細胞にトランスフェクションされました。 発現は蛍光顕微鏡で確認されています。 pcDNA™ 6.2/V5-PL-DESTは、プロモーターを含まないプラスミドで、CMVプロモーターを持つpcDNA™ 6.2/V5-DESTに由来します。
インビトロジェンのVector NTI Advance™配列解析ソフトウェアにより、Multi-Site Gateway®組換え反応用のプライマー設計が簡単に行えます。 使いやすいインターフェースから、クローニングしたいDNA断片配列を選択するか、インポートします。 Vector NTI Advance™ソフトウェアは、ターゲットのDNA配列を増幅するPCRプライマーの配列を設計し、またエントリークローンのベクターマップおよび配列のほか、最終的に作製される発現クローンを表示します。 これほど簡単なのです。