ペプチドを単離した後、逆相（RP）樹脂を用いて塩類およびバッファーを除去します。RPのうち、疎水性ペプチドの回収にはC18マトリックスが最も理想的です。 ペプチドは高水溶性の移動相中で逆相カラムに結合し、塩類およびバッファーは洗い落とされ、ペプチドは高有機移動相を用いて溶出されます。しかし、リン酸化ペプチドなどの親水性ペプチドは、C18樹脂に十分に結合できないため、これらペプチドのより良好な回収にはグラファイトスピンカラムを推奨します。しかし、C18およびグラファイト樹脂は、装置を汚染し、カラム結合、溶出およびイオン化に支障を来す界面活性剤を効率的に除去しません。Thermo Scientific™界面活性剤除去製品は、サンプルを処理する際に通常使用される多種多様な高濃度の界面活性剤に効率的に結合、除去します。

  • 包括的—多数のペプチドクリーンアップストラテジーのための樹脂およびキット
  • 最適化—すべての製品は、ペプチド収率およびLC-MS互換性を最大限に高めるように設計されています
  • 便利使いやすいスピンチップおよびカラムは、ペプチドのより多くの迅速なクリーンアップを実現します。
  • 柔軟性——装置は、培養哺乳類細胞または組織に使用することができます。
  • 検証済み——すべての製品は十分に試験されており、処理したサンプルはThermo Scientific™質量分析計を用いて解析されています。

アプリケーションに適したペプチドクリーンアップ製品を選択してください。

 
 Pierce™ C18 Spin TipsPierce™ C18 TipsPierce™ C18 Spin ColumnsPierce™ Detergent Removal Spin ColumnsPierce™ HiPPR Detergent Removal Spin Columns
Primary ApplicationConcentrate, desalt peptidesConcentrate, desalt peptidesConcentrate, desalt peptidesRemove detergentsRemove detergents
FormatSpin tipTipSpin columnSpin columnSpin column
Resin bed volume20 µL

100 µL

8 mg.125-4 mL slurry0.25-100 µL slurry
Binding capacity or loading volume10 µg80 µg30 µg0.1-1 mL
(>100 µg/mL)		25-200
µL (1-100 µg/mL)
Processing time5-10 min5 min25 min15 min15 min
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リン酸化ペプチドをクリーンアップする必要がありますか？

Thermo Scientific™グラファイトスピンカラムを効率的に使用して、リン酸化ペプチドを迅速に濃縮・脱塩してください。これらのすぐに使えるスピンカラムは、100 μgのリン酸化ペプチドに10分未満でクリーンアップすることができます。

注目データ

Thermo Scientific™ Pierce™ C18スピンチップは、他の定評あるC18チップよりも優れた性能を示します。

Thermo Scientific™ Pierce™ C18スピンチップは、他の定評あるC18チップよりも優れた性能を示します。BSAのトリプシン消化物の10 μgアリコートを、Pierce C18スピンチップまたはZipTip™ピペットチップ（0.6 µL C18樹脂で10 µLチップ）を用いて処理した後、同消化物をLTQ™ Orbitrap™ XL ETD質量分析計で分析しました。ペプチド溶出の基準ピーククロマトグラムをデータセットから抽出し、サンプルの複雑さおよびクロマトグラフィー分離を評価しました。SEQUEST™検索エンジンおよびSwissProtデータベースを用いてMS結果を解析し、タンパク質配列のカバレッジを明らかにしました。

グラファイトスピンカラムを用いて典型的な親水性リン酸化ペプチドの回収が向上。

グラファイトスピンカラムを用いて典型的な親水性リン酸化ペプチドの回収が向上。安定同位体で標識したA3およびB9ペプチド（10 pmol）を1%トリフルオロ酢酸で酸性化し、C18チップまたはPierceグラファイトスピンカラムのプロトコルに従って処理した後、50%アセトニトリル/0.1%ギ酸で溶出しました。所定の安定同位元素で標識したペプチド（5 pmol）を溶出液に添加し、乾燥した後、0.1%ギ酸に再懸濁しました。Orbitrap XL質量分析計を備えた標的化LC-MS/MSでサンプルを解析し、回収率を定量化しました。ペプチド：A3= RPRAApTFPFR†, B9 = RTPKDpSPGIPPFR†.MS絶対量測定に用いられる重元素標識したアミノ酸の位置。

効果的な界面活性剤除去は、より大きなペプチドの同定を可能にします。

効果的な界面活性剤除去は、より大きなペプチドの同定を可能にします。1%SDSを含むHeLa細胞ライセート（0.1 mL、100 µg）のトリプシン消化物を0.5 mLのPierce界面活性剤除去樹脂に通して処理し、LC-MS/MS解析を行いました。処理したサンプルでは、SDSを含んでいない消化物と同様の数のペプチドを同定することができました。ペプチド同定は、SDSを含むサンプルでは大幅に減少します。

C18スピンチップ比較
Thermo Scientific™ Pierce™ C18スピンチップは、他の定評あるC18チップよりも優れた性能を示します。

Thermo Scientific™ Pierce™ C18スピンチップは、他の定評あるC18チップよりも優れた性能を示します。BSAのトリプシン消化物の10 μgアリコートを、Pierce C18スピンチップまたはZipTip™ピペットチップ（0.6 µL C18樹脂で10 µLチップ）を用いて処理した後、同消化物をLTQ™ Orbitrap™ XL ETD質量分析計で分析しました。ペプチド溶出の基準ピーククロマトグラムをデータセットから抽出し、サンプルの複雑さおよびクロマトグラフィー分離を評価しました。SEQUEST™検索エンジンおよびSwissProtデータベースを用いてMS結果を解析し、タンパク質配列のカバレッジを明らかにしました。

リン酸化ペプチドの回収
グラファイトスピンカラムを用いて典型的な親水性リン酸化ペプチドの回収が向上。

グラファイトスピンカラムを用いて典型的な親水性リン酸化ペプチドの回収が向上。安定同位体で標識したA3およびB9ペプチド（10 pmol）を1%トリフルオロ酢酸で酸性化し、C18チップまたはPierceグラファイトスピンカラムのプロトコルに従って処理した後、50%アセトニトリル/0.1%ギ酸で溶出しました。所定の安定同位元素で標識したペプチド（5 pmol）を溶出液に添加し、乾燥した後、0.1%ギ酸に再懸濁しました。Orbitrap XL質量分析計を備えた標的化LC-MS/MSでサンプルを解析し、回収率を定量化しました。ペプチド：A3= RPRAApTFPFR†, B9 = RTPKDpSPGIPPFR†.MS絶対量測定に用いられる重元素標識したアミノ酸の位置。

界面活性剤を除去することで、より良好な同定が可能になります。
効果的な界面活性剤除去は、より大きなペプチドの同定を可能にします。

効果的な界面活性剤除去は、より大きなペプチドの同定を可能にします。1%SDSを含むHeLa細胞ライセート（0.1 mL、100 µg）のトリプシン消化物を0.5 mLのPierce界面活性剤除去樹脂に通して処理し、LC-MS/MS解析を行いました。処理したサンプルでは、SDSを含んでいない消化物と同様の数のペプチドを同定することができました。ペプチド同定は、SDSを含むサンプルでは大幅に減少します。

C18スピンチップのビデオ

質量分析のためのペプチドクリーンアップおよび界面活性剤除去に関するその他の製品

Resources

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.