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in-solution 消化プロトコルを用いたワークフローでは、標準的なタンパク質アッセイを用いてサンプル溶解し、消化のためにサンプルとプロテアーゼの比(w/w)を最適化した後に、タンパク質濃度を測定することがきわめて重要です。また、アイソバリック標識の上流のタンパク質/ペプチドの濃度を測定し、混合する前に等量のサンプルが標識されていることを確認することも必要です。ほとんどのタンパク質アッセイの感度は消化後のペプチド濃度を測定するのに十分ではありませんが、マイクロBCAアッセイがペプチドの定量に使用できる場合があります。
BCA Protein Assay Kit | Micro BCA Protein Assay Kit | Colorimetric Peptide Assay | Fluorometric Peptide Assay | |
Recommended sample type | Protein | Protein | Peptide | Peptide |
Measurement | Colorimetric (562 nm) | Colorimetric (562 nm) | Colorimetric (480 nm) | Fluorescent (Ex. 390, Em. 475 nm) |
Linear range | 20-2000 µg/mL | 0.5-20 µg/mL | 15-1000 µg/mL | 5-1000 µg/mL |
Sensitivity | 5 µg/mL | 0.5 µg/mL | 15 µg/mL | 5 µg/mL |
Minimum sample volume required | 20 µL | 150 µL | 20 µL | 10 µL |
Amount detected at minimum sample volume | 100 ng protein | 75 ng protein | 300 ng peptide | 50 ng peptide |
Assay time | 30 min | 60 min | 30 min | 5 min |
Key feature | Detergent compatible | Detergent compatible | Recommended for TMT-labeled peptides | Recommended for single peptides |
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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.