以下の表は、細胞培養実験において小実可能性のあるいくつかの問題と可能か解決策のリストです。  以下のリストには、細胞培養においてもっともよく遭遇する問題のみがを含まれ、解決策のみについてガイドラインを提供していることに注意してください。  実験結果をより適切に評価するために、ご使用の製品に添付されているマニュアルおよび製品情報シート、ならびに関連する既刊文献および書籍を参照することをお薦めします。

問題：ストックの解凍融解後に生細胞が存在しない

理由
解決策
細胞を不適切に保存した
  • 新しいストックを入手し、液体窒素中で保存してください。  融解するまで細胞を液体窒素中に維持してください。
自家製凍結細胞ストックが生存していない
  • 供給元が推奨する密度で細胞を凍結してください。
  • 継代数の少ない細胞を使用して、自家製凍結細胞ストックを作製してください。
  • 供給元が推奨する細胞凍結手順に正確に従ってください。  このハンドブックで推奨している凍結手順はガイドラインとしてのみ提供されている一般的な手順であることに注意してください。
  • 新しいストックを入手してください。
細胞を不適切に融解した
  • 供給元が推奨する細胞融解手順に正確に従ってください。  このハンドブックで推奨する融解手順はガイドラインとしてのみ提供されている一般的な手順であることに注意してください。
  • 凍結細胞の融解は速やかに行い、播種前に予め温めておいた増殖培地を用いてゆっくり希釈してください。
融解に使用した培地が不適切
  • 供給元が推奨する培地を使用してください。  培地を予め温めているか確認してください。
細胞の過剰な希釈
  • 回収を最適化するために、供給元が推奨する高密度で融解した細胞を播種してください。
穏やかでない細胞の取り扱い
  • 凍結と融解の手順はほとんどの細胞にストレスを与えます。  ボルテックスしたり、細胞を取り除くためにフラスコを叩いたり（昆虫細胞の培養を除く）、あるいは細胞を高速で遠心分離したりしないでください。
凍結培地に使用するグリセロールを明所で保存した（該当する場合）
  • 明所で保存すると、グリセロールが細胞毒性を有するアクロレインに変換されます。  新しいストックを入手してください。

問題：細胞の増殖が遅い

理由
解決策
増殖培地が不適切
  • 供給元が推奨する、予め温めておいた増殖培地を使用します。
増殖培地中の血清の品質が低い
  • 異なるロットの血清を使用してください。
細胞の継代数が多すぎる
  • 健全で、継代数の少ない細胞を使用してください。
細胞がコンフルエンスを超えて増殖していた
  • 哺乳類細胞はコンフルエンスに達する前の対数期増殖に継代してください。
培養物のマイコプラズマによる汚染
  • 細胞、培地および試薬を廃棄してください。  新しい細胞ストックを入手し、新鮮な培地および試薬とともに使用してください。

Gibco 細胞培養の基礎の動画