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細胞培養とは、動物または植物から細胞を取り、好ましい人工環境で増殖させることです。 細胞は組織から直接採取し、培養前に酵素または機械的手段で分離されるか、すでに樹立されている細胞株または細胞種に由来する場合があります。
初代培養とは、細胞を組織から採取し、適切な条件下で、利用可能な基質のすべてを覆う(すなわち、コンフルエンスに達する)まで増殖させる培養段階を指します。 この段階で、増殖を継続するための余地を与えるために新鮮な増殖培地を入れた新しい容器に細胞を移して継代培養(すなわち、植え継ぎ)する必要があります。
最初の継代培養後、初代培養は細胞株またはサブクローンと呼ばれるようになります。 初代培養由来の細胞株は寿命が限られており(つまり有限です、下記参照)、継代するにつれ増殖能がもっとも高い細胞が優勢となり、その結果、細胞集団中における遺伝子型および表現型がある程度均一になります。
細胞株のサブポピュレーションがクローニングまたは他の何らかの方法で培養から最終的に選択されると、この細胞株は細胞種となります。 たいてい、細胞種は親株の開始後に追加の遺伝的変化を獲得します。
正常な細胞は通常限られた回数しか分裂せず、その後増殖能を失います。これは遺伝的に決定されている細胞老化という事象です。このような細胞株は有限寿命細胞株と呼ばれます。しかし、一部の細胞株は 形質転換と呼ばれるプロセスを経て不死になります。このプロセスは自然に生じることも、化学的、またはウイルスを使用して誘導されることもあります。 有限寿命細胞株が形質転換を受け無制限に分裂する能力を獲得すると、その細胞株は不死化細胞株となります。
培養条件は細胞の種類によって大きく異なりますが、細胞を培養する人工的環境は必ず以下のものを含む適切な容器で構成されます。
ほとんどの細胞は足場依存性であり、固体または半固体の基質に接着した状態で(接着または単層培養)で培養しなければなりませんが、培地中で浮遊して成育させることが可能な細胞もあります(浮遊培養)。
過剰な細胞を継代培養から入手できる場合には、適切な保護剤(DMSO、グリセロールなど)で処理し、必要になるまで-130 °C よりも低い温度で保存する必要があります(凍結保存)。 細胞の継代培養および凍結保存の詳細については、培養細胞維持に関するガイドラインを参照してください。
培養細胞は、その形状と外観(すなわち形態)に基づいて3つの基本的なカテゴリーに分類できます。
線維芽(または線維芽細胞様)細胞は、極性または多極性で、細長い形状を有し、基質に接着して増殖します。
上皮様細胞は、より規則的な寸法の多角形で、個別の分離したパッチで基質に接着して増殖します。
リンパ芽球様細胞は球状で、通常、表面に接着せずに浮遊状態で増殖します。
細胞培養は、細胞生物学および分子生物学で使用される主要なツールの一つであり、細胞の正常な形態および生化学(代謝研究、老化など)、細胞に対する薬物および毒性化合物の影響、変異および発がん性を研究するための優れたモデル系を提供します。また、薬物のスクリーニングおよび開発、生物学的化合物(ワクチン、治療用タンパク質など)の大規模製造にも使用されます。これらのアプリケーションのいずれかに細胞培養を用いる主な利点は、クローン細胞のバッチを使用することで得られる結果の一貫性と再現性です。
この動画では、細胞培養に使用する基本的な機器の概要と適切な実験室のセットアップについて説明しています。細胞培養フード中での安全で無菌的な作業法のガイダンスを紹介し、デモンストレーションを行います。
この動画は、細胞培養の汚染を防ぐために必要な手順に焦点を当てています。無菌操作のベストプラクティスを使用して細胞培養を実施するために必要なすべての基本的な行動についてデモンストレーションを行います。
動画 1: 細胞培養入門
| 動画 2: 無菌操作
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