小鼠脾脏淋巴细胞分离方案

脾脏是一个是造血、红细胞清除和免疫功能的器官，含有大量的淋巴细胞，占全身淋巴组织总量的25%，在小鼠中，由于小鼠血液量少，从外周血液中分离大量淋巴细胞较为困难，故经常需要从其鼠脾脏中获取大量的淋巴细胞。因此脾脏十分适合获取免疫细胞，是淋巴细胞的良好来源。它会过滤掉细胞碎片、病原体和不正常的细胞，是红细胞和白细胞以及多种免疫细胞亚型（包括粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞（DC）、NK 细胞、T 细胞和 B 细胞）的来源。白细胞可通过脾细胞粗分离得到。在脾细胞粗分离中，细胞释放酶消化组织从而得到 DC 和巨噬细胞。

淋巴细胞（lymphocyte）是由淋巴器官（包括淋巴结、脾脏以及胸腺）产生的体积最小的白细胞。主要存在于淋巴管中循环的淋巴液中，是机体免疫应答功能的重要细胞成分，是淋巴系统几乎全部免疫功能的主要执行者，是对抗外界感染和监控体内细胞变异的一线“士兵”。淋巴细胞是一类具有免疫识别功能的细胞系，按其发生迁移、表面分子和功能的不同，可分为T淋巴细胞（T细胞）、B淋巴细胞（B细胞）和自然杀伤(NK)细胞。

• 红细胞（RBC）裂解液（例如 eBioscience 10X RBC 裂解缓冲液（多物种），货号：00-4300-54）
• 磷酸盐缓冲液（例如 Gibco PBS (10X)，pH 7.4，货号：70011044）
• 手术刀和刀片
• 细胞培养皿（例如 Thermo Scientific Nunc EasYDish 100 mm 培养皿，货号：150466）
• 一次性移液器（例如 FisherBrand 一次性移液器，货号：137112）
• 50 mL 锥形管（例如 Thermo Scientific Nunc 50 mL 无菌聚丙烯锥形离心管，货号：339652）
• 70 μm 细胞筛网（例如 Fisherbrand 无菌细胞筛网，货号：22-363-548）
• 5–10 mL 注射器（例如 Fisherbrand 10 mL 一次性无菌注射器，货号：14-955-459）
• Hanks' 平衡盐溶液（例如 Gibco Hanks' 平衡盐溶液，HBSS 10x，货号：14060040）

髓系细胞制备

• 胶原酶（例如 Gibco IV 型胶原酶，货号：17104019）
• DNase（例如 Thermo Scientific DNase I 溶液，货号：90083）
• 胎牛血清（例如 Gibco 胎牛血清，货号：26140087）
• EDTA（例如 UltraPure 0.5M EDTA，pH 8.0，货号：15575020）

在室温下执行步骤 1-7，使用冷的缓冲液在冰上执行步骤 8–12。